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본 논문에서는 E. coli O157:H7, S. Typhimurium, S. aureus와 B. cereus에 대한 ddPCR의 검출 효율과 검출한계를 측정하였으며 동시 검출을 위한 multiplex 검출 가능성을 타진하였다. ddPCR은 PCR mix를 포함한 시료를 15,000-20,000개의 droplet으로 분할하여 PCR 하는 방법으로 droplet reader를 이용하여 droplet의 형광 신호를 계수하였다. 식중독 세균의 표적 DNA를 검출하기 위해 2가지 색의 형광 probe (TaqMan)를 제작하였다. ddPCR은 표적 유전자의 형광 신호를 읽어 100 fg/μL부터 10 ng/μL까지의 DNA를 검출 할 수 있었다. 이후에 두 종류의 식중독 세균에서 프라이머 농도를 달리하여 표적 DNA 증폭 크기의 분포가 서로 다르게 구별할 수 있음을 확인하여 multiplex PCR의 가능성이 있음을 알 수 있었다. ddPCR은 비교적 낮은 검출한계를 가지기 때문에 식품에 적은 농도로 존재하는 식중독 세균의 검출에 활용이 가능할 것으로 생각되었다. 또한 식품의 전처리 조건 확립과 반응조건 확립을 통하여 향후 복잡한 matrix effect를 가지는 식품에서 극 미량의 균 검출도 가능할 것으로 생각되었다.
목차
Abstract
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
요약
References
참고문헌 (16)
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[학술지(정기간행물)] - Kye Man Cho / 2008 / Simultaneous Detection of Food-borne Pathogenic Bacteria in Readyto- eat Kimbab Using Multiplex PCR Method / Food Science and Biotechnology 17 (6) : 1240 ~ 1245
[학술지(정기간행물)] - Bhagwat AA / 2003 / Simultaneous detection of Escherichia coli O157:H7, Listeria monocytogenes and Salmonella strains by realtime PCR / Int. J. Food Microbiol 84 : 217 ~ 224
[학술지(정기간행물)] - Kim J / 2006 / Simultaneous detection by PCR of Escherichia coli, Listeria monocytogenes and Salmonella Typhimurium in artificially inoculated wheat grain / Int. J. Food Microbiol 111 : 21 ~ 25
[학술지(정기간행물)] - Kim JS / 2007 / A novel multiplex PCR assay for rapid and simultaneous detection of five pathogenic bacteria: Escherichia coli O157:H7, Salmonella, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, and Vibrio parahaemolyticus / J. Food Prot 70 : 1656 ~ 1662
[학술지(정기간행물)] - Malorny B / 2003 / Standardization of diagnostic PCR for the detection of foodborne pathogens / Int. J. Food Microbiol 83 : 39 ~ 48
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