Cloning, Expression, and Characterization of a Cold-Adapted Lipase Genefrom an Antarctic Deep-Sea Psychrotrophic Bacterium, Psychrobacter sp.7195

ZHANG; JINWEI; SHU LIN; RUNYING ZENG

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자료유형: 학술저널

저자정보: ZHANG JINWEI SHU LIN RUNYING ZENG

저널정보: 한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제17권 제4호

발행연도: 2007.1

수록면: 604 - 610 (7page)

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A psychrotrophic strain 7195 showing extracellularlipolytic activity towards tributyrin was isolated from deep-sea sediment of Prydz Bay and identified as a Psychrobacterspecies. By screening a genomic DNA library of Psychrobactersp. 7195, an open reading frame of 954 bp coding for a lipasegene, lipA1, was identified, cloned, and sequenced. Themass of 35,210 kDa. It had one consensus motif, G-N-S-M-G(GXSXG), containing the putative active-site serine, whichwas conserved in other cold-adapted lipolytic enzymes. Therecombinant LipA1 was purified by column chromatographywith DEAE Sepharose CL-4B, and Sephadex G-75, andpreparative polyacrylamide gel electrophoresis, in sequence.The purified enzyme showed highest activity at 30oC, and wasunstable at temperatures higher than 30owas a typical cold-adapted enzyme. The optimal pH for activitywas 9.0, and the enzyme was stable betwen pH 7.0-10.0after 24 h incubation at 4oC. The adition of Ca2+ and Mg2+enhanced the enzyme activity of LipA1, whereas the Cd2+,Zn2+, Co2+, Fe3+, Hg2+, Fe2+, Rb2+, and EDTA strongly inhibitedsuch as Triton X-100, Tween 80, Tween 40, Span 60, Span 40,CHAPS, and SDS, and showed better resistance towards them.Substrate specificity analysis showed that there was a preferencefor trimyristin and p-nitrophenyl myristate (C14 acyl groups).

#Deep-sea sediment #cold-adapted lipase #Psychrobacter #recombinant proteinEnzymes from psychrotrophic and psychrophilicmicroorganisms have recently received increasing attention #owing to their relevance for both basic and applied research[1 #8]. This

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A / 1990 / Separation and characterization of two molecular forms of Geotrichum candidum lipase : 426 ~ 430

Alquati, C / 2002 / The cold-active lipase of Pseudomonas fragi 269 : 3321 ~ 3328

Amada, K / 2000 / Overproduction in Escherichia coli, purification and characterization of a family I.3 lipase from Pseudomonas sp 1478 : 201 ~ 210

Arpigny, J. L / 1995 / Cloning, sequence and structural features of a lipase from the antarctic facultative psychrophile Psychrobacter immobilis B10 1263 : 103 ~

Arpigny, J. L. / 1999 / Bacterial lipolytic enzymes: Classification and properties 1 : 177 ~ 183

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