Bacillus pseudomycoides로 부터 분리된 alanine racemase 유전자의 발현 및 생화학 특성

강한철; 김나현; 정유정; 윤상홍; 이창묵

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자료유형: 학술저널

저자정보: 강한철 (농촌진흥청, 국립농업과학원, 기능성물질개발과) 김나현 (농촌진흥청, 국립농업과학원, 기능성물질개발과) 정유정 (농촌진흥청, 국립농업과학원, 기능성물질개발과) 윤상홍 (농촌진흥청, 국립농업과학원, 기능성물질개발과) 이창묵 (농촌진흥청, 국립농업과학원, 기능성물질개발과)

저널정보: 한국응용생명화학회 Journal of applied biological chemistry Journal of applied biological chemistry 제53권 제3호

발행연도: 2010.1

수록면: 132 - 138 (7page)

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B. pseudomycoides로 부터 alanine racemase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 6xHistidine 이 결합된 pET-21 운반체를 이용하여 E. coli BL21(DE3)에서 발현시키고 생화학 특성을 조사하였다. 재조합된 alanine racemase는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE 분석에서 약 46 kDa의 단일밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 여러 아미노산 중에서 L-alanine에 대하여 가장 높은 활성도를 보이고 D-alanine에 대하여 두번째로 높은 활성도를 보였다. 따라서 분리된 효소는 alanine racemase로 판단되었다. 분리된 효소는 D-cysteine에 하여 상당히 저해가 되었다. 효소의 최적 활성도는 pH 9.0 근처에서 관찰되었고 산성의 조건보다는 알칼리의 조건에서 보다 안정하였다. 보효소인 PLP 0.3mM의 첨가에 의해 효소의 활성도는 약 70% 가량 증대되었다.

#alanine racemase #Bacillus pseudomycoides

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