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한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제33권 제4호
발행연도
2005.1
수록면
281 - 287 (7page)

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Paenibacillus polymyxa 유래의 endoinulinase 유전자(inu,2.733 kb, E.C. 3.2.1.7)를 Saccharomyces cerevisiae에 발현시키기 위해 대장균과 효모의 shuttle vector (GAL1promoter 함유)에 subcloning하여 구축된 pYGENIU27 (8.6kb) plasmid를 S. cerevisiae SEY2102에 형질전환하였다.Uracil이 결핍된 SD 배지와 inulin이 포함된 배지에서 효모형질전환체를 선별하였다. 효모 형질전환체의 배양에서endoinulinase는 periplasmic space에 다량 존재함이 확인되었다. YPDG 배지에서 재조합 endoinulinase는 총 활성 1.81unit/ml으로 생산되었다. Inulooligosaccharides (IOSs) 생산을 위한 효소의 최적 반응 조건으로 pH 8.0, 반응온도 45oC,기질은 Jerusalem artichoke로 결정되었다. 효소활성은 pH10.0에서도 안정적으로 유지되었으며, 최적 반응 조건 (ginulin당 36 unit 효소 이용)에서 반응 10분 후부터 IOSs가생산되기 시작하였다. 생성된 IOSs의 구성분으로 inulobiose(F2), inulotriose (F3)와 inulotetraose (F4)가 생성되었고, 이중에서 F3가 주성분이었다. 이상의 결과는 효모에서 생산된재조합 endoinulinase를 이용하여 inulin으로부터 기능성 감미소재인 IOSs의 산업적 생산을 위한 기초결과로 활용될 것이다.

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