Saccharomyces cerevisiae에서 GAL10 promoter와 exoinulinase 분비 서열을 이용한 Clostridium endoglucanase A의 과발현ㆍ분비

임명예; 이진우; 이재형; 김연희; 서진호; 남수완

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자료유형: 학술저널

저자정보: 임명예 이진우 이재형 김연희 서진호 남수완

저널정보: 한국생명과학회 생명과학회지 생명과학회지 제17권 제9호

발행연도: 2007.9

수록면: 1,248 - 1,254 (7page)

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Kluyveromyces marxianus 유래의 exoinulinase (INU1) 분비 서열과 GAL10 promoter를 이용하여 Clostridium thermocellum endoglucanase A gene (celA)의 과발현과 분비 성능 검증연구를 수행하였다. 자체 분비 서열을 가지는 pYEG- CT1 과 INU1 분비 서열을 가지는 pYInu-CT1, 두개의 plasmid는 S. cerevisiae SEY2102와 S. cerevisiae 2805에 각각 형질전환시켜 uracil이 결핍된 배지에서 선별하였다. celA gene 자체 분비 서열보다 INU1 분비 서열을 사용했을 때 발현량과 분비효율은 각각 약 18~22% 와 11% 향상되었다. 이 중 361 unit/l의 발현율과 89%의 plasmid 안정성, 그리고 70%의 분비효율을 보인 S. cerevisiae 2805/pYInu-CT1 효모 형질전환체를 cellolose를 효과적으로 분해하는 재조합 효모 생균제로 선별하였다. Galactose 배지내에서 S. cerevisiae 2805/ pYInu-CT1의 발효조회분배양 결과, 총발현량과 분비효율은 각각 418 unit/l 와 73% 로 나타났다. 또한 분비된 endoglucanase A는 분자량 100kDa 이상에서 활성 밴드를 보여, N-linked 당쇄부가에 의해 상당한 비율의 당쇄가 부가됨을 추측할 수 있었다.

#Secretion #Clostridium thermocellum #endoglucanase #Saccharomyces cerevisiae #exoinulinase signal sequence

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1. [학술지(정기간행물)] - Beguin, P. / 1985 / Sequence of a cellulase gene of the thermophilic bacterium Clostridium thermocellulm / J. Bacteriol 162 : 102 ~ 105

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4. [학술지(정기간행물)] - Chung, B. H / 1996 / Highly-dfficient secretion of heterologous protein from Saccharomyces cerevisiae using inulinase signal peptide / Biotechnol. Bioeng 49 : 473 ~ 479

5. [학술지(정기간행물)] - Chung, D. K. / 1997 / Expression and secretion of Clostridium thermocullum endoglucanase A gene (celA) in different Saccharomyces cerevisiae strains / Biotechnol. Lett 19 : 503 ~ 506

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