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저자정보
Kang Kyu-Ri (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.) Kwon Yi-Hyeon (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.) Cho Gyu-Won (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.) Choi Gi-Sub (CLIPS BnC, Research Center, Seoul, Korea.) Ji Joon-Hwan (CLIPS BnC, Research Center, Seoul, Korea.) Kang Hyun-Mi (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.Department of Pediatrics, College of Medicine, The Catholic) Lee Soo-Young (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.Department of Pediatrics, Bucheon St. Mary’s Hospital, Coll) Kang Jin-Han (The Vaccine Bio Research Institute, Seoul St. Mary’s Hospital, College of Medicine, The Catholic University of Korea, Seoul, Korea.Department of Pediatrics, College of Medicine, The Catholic)
저널정보
대한백신학회 Clinical and Experimental Vaccine Research Clinical and Experimental Vaccine Research Vol.13 No.3
발행연도
2024.7
수록면
242 - 252 (11page)
DOI
10.7774/cevr.2024.13.3.242

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Purpose: In this study, an in-house enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was devel oped and validated. The titer of ELISA was calculated using the reference line (RFL) method based on the standard curve drawn using the international reference anti-mouse serum NIBSC (National Institute for Biological Standards and Control) 97/642. Materials and Methods: In the development step, signal to noise was depicted to select the buffers that showed the most appropriate ratio. In the validation step, standard range, preci sion, dilution linearity, and specificity were confirmed, and RFL and parallel line (PLL) methods were compared in precision and dilution linearity. Results: Coating concentration for plate was achieved at 0.1 μg/mL for pertussis toxin (PT), 0.15 μg/mL for filamentous hemagglutinin antigen (FHA), and 0.25 μg/mL for pertactin (PRN). The signal to noise ratio was 22.02 for PT, 14.93 for FHA, and 8.02 for PRN with 0.25% goat serum in phosphate-buffered saline (PBS) as a dilution buffer, and 2% skim milk in PBS as a blocking buffer. Based on the precision results, we assessed the lower limit of quantification by 1, 0.2, and 1.5 EU/mL concentration for PT, FHA, and PRN which met the ICH (International Council for Harmonization) M10 criteria of a 25% accuracy and total error of 40%. In specificity, homolo gous serum was spiked into heterologous serum and the accuracy met the criteria. There was no difference in the results between RFL and PLL calculations (p-value=0.3207 for PT, 0.7394 for FHA, 0.2109 for PRN). Conclusion: ELISA validated with RFL calculation method in this study is a relatively accurate assay for mouse humoral immunogenicity test.
#Enzyme-linked immunosorbent assay #Pertussis #Validation #Unit calculation #Mu rine

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