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자료유형
학술저널
저자정보
Wang, Yuanyuan (College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University) Xu, Danyun (College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University) Sun, Xueyan (College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University) Zheng, Lisheng (College of Plant Science and Technology, Huazhong Agricultural University) Chen, Liguo (College of Plant Science and Technology, Huazhong Agricultural University) Ma, Aimin (College of Food Science and Technology, Huazhong Agricultural University)
저널정보
한국균학회 Mycobiology Mycobiology 제47권 제1호
발행연도
2019.1
수록면
59 - 65 (7page)

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Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation (ATMT), as a simple and versatile method, achieves successful transformation in the yeast-like cells (YLCs) of Tremella fuciformis with lower efficiency. Establishment of a more efficient transformation system of YLCs is important for functional genomics research and biotechnological application. In this study, an enzymolysis-assisted ATMT method was developed. The degradation degree of YLCs depends on the concentration and digestion time of Lywallzyme. Lower concentration (${\leq}0.1%$) of Lywallzyme was capable of formation of limited wounds on the surface of YLCs and has less influence on their growth. In addition, there is no significant difference of YLCs growth among groups treated with 0.1% Lywallzyme for different time. The binary vector pGEH under the control of T. fuciformis glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene (gpd) promoter was utilized to transform the enzymolytic wounded YLCs with different concentrations and digestion time. The results of PCR, Southern blot, quantitative real-time PCR (qRT-PCR) and fluorescence microscopy revealed that the T-DNA was integrated into the YLCs genome, suggesting an efficient enzymolysis-assisted ATMT method of YLCs was established. The highest transformation frequency reached 1200 transformants per $10^6$ YLCs by 0.05% (w/v) Lywallzyme digestion for 15 min, and the transformants were genetically stable. Compared with the mechanical wounding methods, enzymolytic wounding is thought to be a tender, safer and more effective method.
#Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation #enzymolytic wounding #transformation efficiency #yeast-like cells #Tremella fuciformis

목차

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Cheung PCK / 1996 / The hypocholesterolemic effect of two edible mushrooms : Auricularia auricula(treeear)and Tremella fuciformis(white jelly-leaf)in hypercholesterolemic rats / Nutr Res 16:1721~1725 google schola Gao Q / 1996 / Characterisation of acidic heteroglycans from Tremella fuciformis berk with cytokine stimulating activity / Carbohydr Res 288:135~142 google schola Zhu H / 2006 / Chromosomal integration of the Vitreoscilla hemoglobin gene and its physiological actions in Tremella fuciformis / Appl Microbiol Biotechnol 72:770~776 google schola Sun SJ / 2009 / Isolation of gpd promoter from Tremella fuciformis and driving expression of egfp gene / DNA Cell Biol 28:65~70 google schola Shin DI / 2015 / Oral vaccination of mice with Tremella fuciformis, yeast-like conidium cells expressing HBsAg / Biotechnol Lett 37:539~544 google schola

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