Pichia pastoris에서 Zobellia galactanivorans 유래 재조합 β-Agarase의  고효율 분비생산

석지환; 박희균; 이상현; 남수완; 전숭종; 김종현; 김연희

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자료유형: 학술저널

저자정보: 석지환 박희균 이상현 남수완 전숭종 김종현 김연희

저널정보: 한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제38권 제1호

발행연도: 2010.1

수록면: 40 - 45 (6page)

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Agarose의 β-1,4결합을 분해하는 Zobellia galactanivorans 유래의 β-agarase 유전자(agaB)는 클로닝되었고, AOX1(alcohol oxidase 1, methanol inducible) promoter 하류에Saccharomyces cerevisiae mating factor alpha-1 secretion signal(MFα1)를 연결하여 MFα1-AgaB를 구축하였다. 구축된 plasmid pPIC-AgaB(9 kb)를 Pichia pastoris genome에HIS4 gene 위치에 integration하였고, colony PCR을 통해확인하였다. Methanol 첨가 배지에서 자란 형질전환체는 iodine solution의 첨가에 의해 red halos를 보였으며, P. pastoris에서 agaB의 효율적 분비 발현을 확인하였다. SDS-PAGE와zymographic analysis에서 β-agarase의 분자량은 약 53 kDa 으로 추정되었으며, 15% 정도의 N-linked glycosylation이일어났음을 알 수 있었다. P. pastoris GS115/pPIC-AgaB의48시간 baffled flask culture에서 세포외 β-agarase의 활성은각각 0.1, 0.5, 1% methanol의 유도에 의해 1.34, 1.42 그리고 1.53 units/mL의 활성을 보였다. 대부분의 β-agarase의 활성은 세포 외에서 관찰되었고, 분비효율은 98%였으며 분비시의 glycosylation에 의해 열안정성도 증가되었다.

#β-agarase #overexpression #seretion #Zobellia galactanivorans #Pichia pastoris

참고문헌 (24)

참고문헌 신청

Araki. T / 1998 / Purification and characterization of agarases from a marine bacterium / J. Mar. Biotechnol. 6 : 260 ~ 265

Cregg, J. M / 1993 / Recent advances in the expression of foreign genes in Pichia pastoris / Bio/Technology 11 : 905 ~ 910

Do,J.H / 1997 / Extraction and purification of agar from Gelidium amansii / J. Korean Fish Soc. 30 : 423 ~ 427

Duckworth, M / 1971 / Structure of ahar. I. Fractionation of a complex mixture of polysaccharides / Carbo. Res. 16 : 189 ~ 197

Fu Xiao Ting / 2009 / Gene Cloning, Expression, and Characterization of a β-Agarase, AgaB34, from Agarivorans albus YKW-34 / Journal of Microbiology and Biotechnology 19 (3)

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