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L-ascorbic acid (AA)의 2번 위치의 수산기에 부위 특이적 활성을 갖는 Paenibacillus sp. JB-13 유래의 cyclodextrin glucanotransferase (CGTase, EC 2.4.1.19) 유전자(cgt gene)를 pEXP7 발현 vector에 클로닝하여 재조합 균주를 구축하였다. 재조합 균주의 CGTase 생산 최적 조건을 검토하여 본 결과 LB 배지에 0.5% glucose, 3.0% polypeptone, 0.3% K₂HPO₄, 0.5% NaCl이 되도록 추가하고, 초기 pH 7.0, 접종량 2%, 통기량 0.1 vvm, 배양 온도 37℃, 배양 시간 14시간의 조건에서 최대 활성을 나타내었다. 재조합 균주와 기존 균주의 CGTase 활성을 비교한 결과 재조합 균주는 배양 14시간째 640 units/㎖의 활성을 가져 기존 균주에 비해 70%의 활성을 나타내지만 배양 시간을 1/4로 단축시킬 수 있다는 이점이 있음을 확인하였다. 재조합 균주가 생산한 CGTase를 AA-2G 합성에 적용하여 AA-2G를 합성하고 HPLC로 분석한 결과 단일 peak를 확인할 수 있었고 α-glucosidase를 처리하여 확인한 결과 AA와 glucose로 분리됨을 확인할 수 있었다.
목차
재료 및 방법
결과 및 고찰
감사의 말
참고문헌
ABSTRACT
참고문헌 (25)
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1. [학술지(정기간행물)] - Abe, S. / 1991 / Investigation of the active site of Bacillus macerans cyclodextrin glucanotransferase by use of modified maltooligosaccharides / J. Biochem 110 : 756 ~ 761
2. [학술지(정기간행물)] - Ahn, J.H. / 1990 / Cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus stearothermophilus : Purification by affinity chromatography and its properties / Kor. J. Appl. Microbiol.Biotechnol 18 : 585 ~ 590
3. [학술지(정기간행물)] - Bae, K.M. / 2001 / Production of 2-O-α-Dglucopyranosyl L-ascorbic acid by cyclomaltodextrin glucanotransferase from Paenibacillus sp. JB-13 / Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol 29 : 31 ~ 36
4. [학술지(정기간행물)] - Bovetto, L.J. / 1992 / Cyclomaltodextrin glucanotransferase from Bacillus circulans E 192. 1. Purification and characterization of the enzyme / Biotechnol. Appl. Biochem 15 : 48 ~ 58
5. [학술지(정기간행물)] - Frei, B. / 1998 / Ascorbate is an outstanding antioxidant in human blood plasma / Proc. Natl. Acad. Sci 86 : 6377 ~ 6381
2. [학술지(정기간행물)] - Ahn, J.H. / 1990 / Cyclodextrin glucanotransferase from Bacillus stearothermophilus : Purification by affinity chromatography and its properties / Kor. J. Appl. Microbiol.Biotechnol 18 : 585 ~ 590
3. [학술지(정기간행물)] - Bae, K.M. / 2001 / Production of 2-O-α-Dglucopyranosyl L-ascorbic acid by cyclomaltodextrin glucanotransferase from Paenibacillus sp. JB-13 / Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol 29 : 31 ~ 36
4. [학술지(정기간행물)] - Bovetto, L.J. / 1992 / Cyclomaltodextrin glucanotransferase from Bacillus circulans E 192. 1. Purification and characterization of the enzyme / Biotechnol. Appl. Biochem 15 : 48 ~ 58
5. [학술지(정기간행물)] - Frei, B. / 1998 / Ascorbate is an outstanding antioxidant in human blood plasma / Proc. Natl. Acad. Sci 86 : 6377 ~ 6381
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