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For the expression in Saccharomyces cerevisiae, Bacillus stearothermophilus cyclodextrin glucanotransferase gene (cgtS) in pCGTS (4.8 kb) was subcloned into the surface expression vector, pYD1 (GAL1 promoter). The constructed plasmid, pYDCGT (7.2 kb) was introduced into S. cerevisiae EBY100 cells, and then yeast transformants were selected on the synthetic defined media lacking tryptophan. The formation of cyclodextrin (CD) was confirmed with active staining of culture broth of transformant grown on starch medium. Enzymatic reaction products with respect to the culture time and the reaction time were examined by TLC analysis. The results indicated that the enzyme activity was exhibited after 12 h cultivation and CD was produced after 10 min of enzymatic reaction. When the surface-engineered yeast cells were cultured on galactose medium, maximum activities of CGTase were about 21.3 unit/l and 16.5 unit/l at 25℃ and 30℃, respectively. The plasmids stability showed about 80% even at 25℃ and 30℃.
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Bender, M. I. and M. Komiyama. 1978. Cyclodextrin Chemistry. 3th eds., Springer Verlag, New York.
Boder, E. T. and K. D. Wittrup. 1997. Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries. Nature Biotechnol. 15, 553-557.
Boder, E. T. and K. D. Wittrup. 2000. Yeast surface display for directed evolution of protein expression, affinity, and stability, pp. 430-444, In J. Thorner, S. D. Emr and J. N. Abelson (eds.), Methods in Enzymology. Vol. 328, Academic Press Inc., New Yo
Coppellaro, C., C. Baldermann, R. Rache, and W. Tanner. 1994. Mating type-specific cell-cell recognition of Saccharomyces cerevisiae: Cell wall attachment and active site of aand α-agglutinin. EMBO J. 13, 4737-4744.
Fujiwara, S., H. Kakihara, B. W. Kim, A. Leujeune, M. Kanemoto, K. Sakaguchi, and T. Imanaka. 1992. Cyclization chracteristics of cyclodextrin glucanotransferase are con ferred by the NH2-terminal region of the enzyme. Appl. Environ. Microbiol. 58, 4016-4
Boder, E. T. and K. D. Wittrup. 1997. Yeast surface display for screening combinatorial polypeptide libraries. Nature Biotechnol. 15, 553-557.
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