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학술저널
저자정보
오건봉 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 이해선 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 황성수 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 옥선아 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 정학재 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 변승준 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 이풍연 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과) 임기순 (농촌진흥청 국립축산과학원 동물바이오공학과)
저널정보
한국동물번식학회 한국수정란이식학회지 한국수정란이식학회지 제31권 제3호
발행연도
2016.1
수록면
161 - 168 (8page)

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Nucleotide metabolism in endothelium is variable between different species. Recent studies demonstrated that this variability could contribute coagulation dysfunction, even though organs of the alpha 1,3-galactosyltransferase gene knockout pig were transplanted into the primate. CD73 (ecto-5'-nucelotidase) is an enzyme at cell surface catalyzing the hydrolysis of adenosine triphosphate to adenosine, which plays role on a substance for anti-inflammatory and anti-coagulant. Thus, overexpression of CD73 in endothelial cells of the pig is considered as an approach to reduce coagulopathy. In this study, we constructed a human CD73 expression vector under control of porcine Icam2 promoter (pIcam2-hCD73), which is expressed specifically at endothelial cells, and of CMV promoter as a control (CMV-CD73). First, we transfected the CMV-CD73 vector into HEK293 cells, and then confirmed CD73 expression at cell surface by flow cytometry analysis. Next, we transfected the pIcma2-CD73 and CMV-CD73 vectors into primary porcine fibroblasts and endothelial cells. Consequence was that the pIcma2-CD73 vector was expressed only at the porcine endothelial cells, meaning that the pIcam2 promoter lead to endothelial cell-specific expression of CD73 in vitro. Finally, we nucleofected the pIcam2-hCD73 vector into passage 3 fibroblasts, and enforced hygromycin selection of 400mg/ml. We were able to obtain forty three colonies harboring pIcam2-CD73 to provide donor cells for transgenic cloned porcine production.
#CD73 #porcine Icam2 promoter #coagulation #porcine fibroblasts

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