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A sequential optimization strategy based on statisticalof cyclosporin A (CyA) by Tolypocladium inflatum DSMZ915 in a submerged culture. A 2-level Plackett-Burman designwas used to screen the bioproces parameters significantlyinfluencing CyA production. Among the 11 variables tested,sucrose, amonium sulfate, and soluble starch were selected,owing to their significant positive effect on CyA production.A response surface methodology (RSM) involving a 3-levelBox-Behnken design was adopted to acquire the best processthe relationship between the three variables and the CyA yield,and the optimal combination of the major media constituentsfor cyclosporin A production, evaluated using the nonlinearoptimization algorithm of EXCEL-Solver, was as follows (g/l):sucrose, 20; starch, 20; and amonium sulfate, 10. Thepredicted optimum CyA yield was 113 mg/l, which was 2-foldthe amount obtained with the basal medium. Experimentalverification of the predicted model resulted in a CyA yieldyield.

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