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대한바이러스학회 JOURNAL OF BACTERIOLOGY AND VIROLOGY 大韓바이러스學會誌 제22권 제1호
발행연도
1992.6
수록면
81 - 90 (10page)

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The polymerase chain reaction (PCR) was used to detect Human Immunodeficiency Virus (HIV)- 1 and -2 DNA in peripheral blood from 45 HIV seropositive Koreans and 50 normal healthy adults. As a positive control, recombinant plasmid DNA pNL432 containing full length of HIV-1 DNA was used. Each of amplified DNAs using three synthetic oligonucleotide primers (SK100/SK104, SK38/ SK104) was fragment of 291 and 115 base pairs (bp) located respectively at gag of HIV. The adequacy of the DNA for amplification was evaluated by amplifying the HLA-DQB locus (DQB-R/ DQB-L). For the enhancement of sensitivity, the first amplified DNA products were reamplified by PCR (two-step PCR) and then dot blot hybridization on first and second amplified DNA products were performed using digoxigenin labeled probes (SK19 for HIV-1, SK109 for HIV-2). The sensitivity and the specificity of four detection methods (PCR and gel electrophoresis ; PCR and hybridization ; two-step PCR and gel electrophoresis; two step PCR and hybridization) were estimated among them. The results were as follows; 1. 2 fg of pNL432 DNA was detected by the first PCR ampification, 200 ag by the two-step PCR or PCR and hybridization, and 2 ag by two-step PCR and hybridization. 2. In the first PCR, well extracted DNA was better as a target DNA for PCR amplification than crude extracted DNA. 3. By two step PCR, all of the seropositive specimens were found to be positive, all of the serongative specimens were negative. 4. All of the amplified DNA were positive by dot blot hybridization with HIV-1 specific SK19 probe, but were weak or negative with HIV-2 specific SK109 probe. It is suggested that the PCR and hybridization is sensitive and can be used for rapid detection of HIV infections.
#HIV #PCR digoxigenin #labeled probe

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