Real-Time PCR을 이용한 백묵병 원인균 Ascosphera apis의 신속 검출

이혜민; 이도부; 한상훈; 남성희; 임윤규; 윤병수

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자료유형: 학술저널

저자정보: 이혜민 이도부 한상훈 남성희 임윤규 윤병수

저널정보: 한국양봉학회 Journal of Apiculture 韓國養蜂學會誌 제20권 제2호

발행연도: 2005.12

수록면: 109 - 116 (8page)

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본 연구에서는 꿀벌 진균성 질병인 백묵병의 원인균인 Ascosphaera apis의 신속하고 정확한 동정을 위해 이들의 18S rRNA gene을 이용한 Real-Time PCR 진단법을 확립하고자 하였다. Real-Time PCR 진단법은 정확성, 민감성, 특이성, 신속성 등의 장점을 가지고 있어 원인균의 정확한 진단과 정량까지 가능하게 하였다.
PCR 검출을 위한 특이 primer는 본 연구실에서 제작한 A. apis 18S-SR2를 사용하였으며, 이는 701 bp 의 증폭산물을 보여준다. 최적의annealing 조건은 63.1℃로 나타났으며, 본 연구에서 확립된 PCR 표준조건은 94℃, 10 min pre-denaturation/ 94℃, 30s; 63.1℃, 30s; 72℃, 30s (40 cycles)/72℃ 5MIN post-polymerization으며, melting point analysis를 위해 55℃에서 94℃가지 온도를 상승시켰다.
이 특이 PCR을 통해 A. apis chromosomal DNA 10 pg까지는 검출과 Ct 값의 계산으로 정량이 가능함을 보여주었다. 또한, 10 fg의 template 조건아래에서는 검출이 가능하고 Tm 값을 통해 전기영동에 의한 분석에 준하는 정확성을 보여주는 것이 확인되었다. 또한, 다른 진균, 세균들과의 혼합된 시료에서도 A. apis의 병원균을 정확히 검출할 수 있음이 확인되었다.
이는 백묵병의 진단과 함께 오염의 정도를 알 수 있으며, 나아가 벌통 내에 잠재되어 있는 A. apis의 포자 수준까지 검출이 가능함을 보여주어 사전예방을 통한 방제가 이루어질 수 있음을 시사한다.

#Ascosphaera apis #Chalkbrood #Real-Time PCR #18S rRNA gene

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한상훈

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남성희

소속기관 국립농업과학원

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