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저자정보
이동혁 (한남대학교) 정효선 (한스바이오메드) 이정희 (한남대학교) 김태은 (한남대학교) 이정숙 (한스바이오메드) 김인섭 (한남대학교)
저널정보
한국미생물학회 미생물학회지 미생물학회지 44권 1호
발행연도
2008.3
수록면
14 - 21 (8page)

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소의 혈액, 세포, 조직, 기관 등은 생물의약품과 조직공학제제, 세포치료제의 원료로 널리 사용되고 있다. 소유래 물질을 원료로 사용한 제제의 경우 소유래 원료 물질에 다양한 바이러스가 오염된 사례가 있기 때문에 바이러스안전성 검증이 필수적이다. Bovine herpesvirus type 1 (BHV-1)은 소에게 가장 흔하게 감염되는 바이러스 중의 하나이다. 소유래 물질을 원료로 하는 생물의약품, 조직공학제제, 세포치료제 등에서 BHV-1 안전성을 확보하기 위해, 원료물질, 제조공정, 완제품에서 BHV-1을 정량적으로 검출하고, 제조공정에서 BHV-1 제거 검증을 위한 시험법으로 활용이 가능한 BHV-1 real-time PCR 시험법을 확립하였다. BHV-1에 특이적인 primer를 선별하였으며, 형광염료 SYBR Green I을 사용하여 BHV-1 DNA 정량 검출 시험법을 최적화하였다. 세포배양법에 의한 감염역가와 비교한 결과 real-time PCR 민감도는 2 TCID??/㎖이었다. 확립된 시험법의 신뢰성(reliability)을 보증하기 위해 시험법 검증을 실시한 결과 특이성(specificity)과 재현성(reproducibility)이 우수함을 확인하였다. 확립된 realtime PCR을 생물의약품 제조공정 검증에 적용할 수 있는지 확인하기 위하여 인위적으로 BHV-1을 오염시킨 Chinese hamster ovary (CHO) 세포주와 소유래 콜라겐에서 BHV-1 검출 시험을 실시하였다. BHV-1을 감염시킨 CHO 세포에서 세포변병효과를 관찰할 수 없었지만, 세포와 세포배양 상청액에서 BHV-1을 정량적으로 검출할 수 있었다. 소유래 콜라겐에서도 10 TCID??/㎖까지 정량적으로 검출할 수 있었다. 위와 같은 결과에서 확립된 BHV-1 real-time PCR 시험법은 생물의약품 안전성 보증을 위한 세포주 검증, 생물의약품 생산 공정 검증, 바이러스 제거 공정 검증 등에서 감염역가 시험법과 같은 생물학적 시험법을 대신할 수 있는 신속하고, 특이성과 민감성이 우수한 시험법임을 확인하였다.
#bovine herpesvirus type 1 #Chinese hamster ovary (CHO) cell #collagen #real-time PCR #virus validation

목차

재료 및 방법
결과
고찰
감사의 말
참고문헌
ABSTRACT

참고문헌 (28)

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1. [학술지(정기간행물)] - 길태건 / 2005 / 혈장분획제제 제조공정에서 크로마토그래피 세척 검증을 위한 모델바이러스로서의 Porcine Parvovirus 정량 / 미생물학회지 41 (3) : 216 ~ 224 dbpia 2. [학술지(정기간행물)] - 류승렬 / 2003 / 세포배양 유래 생물의약품 중 Bovine Viral Diarrhoea Virus 검출을 위한 RT-PCR, Real-Time RT-PCR 및 RT-PCR-ELISA 기법의 검출한계와 정량범위 평가 / Journal of Bacteriology and Virology 33 (2) : 161 ~ 168 dbpia 3. [학술지(정기간행물)] - Adamson, S.R / 1999 / Experiences of virus, retrovirus and retrovirus- like particles in chinese hamster ovary (CHO) and hybridoma cells used for production of protein therapeutics / Dev. Biol. Stand 93 : 89 ~ 96 google schola 4. [학술지(정기간행물)] - Celis, P / 2004 / European regulatory guidance on virus safety of recombinant proteins, monoclonal antibodies and plasma derived medicinal products / Dev. Biol. Stand 118 : 3 ~ 10 google schola 5. [학술지(정기간행물)] - Myung-gon Kang / 2006 / Bovine amniotic membrane transplantation for the treatment of descemetocele in a dog / 한국임상수의학회지 23 (3) : 334 ~ 336 google schola

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