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저자정보
저널정보
대한산부인과학회 Obstetrics & Gynecology Science Obstetrics & Gynecology Science 제46권 제7호
발행연도
2003.1
수록면
9 - 9 (1page)

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목적 : 세포사의 한 종류인 고사 (apoptosis)는 인체의 항상성 (homeostasis)을 유지하고 균형을 유지하기 위한 세포사의 다양한 과정의 하나이다. 최근에는 이러한 고사의 정도를 정량적으로 측정함으로써 항암화학 요법제의 투여전 감수성 지표로 이용해 보려는 연구들도 진행되고 있다. 따라서 본 연구자들은 OVCAR-3 난소암 세포주에서 taxol을 투여한 후 세포주기 분획의 변화 및 G0G1 전분기 분획의 출현과 annexin V와 PI 또는 cytokeratin의 염색에 따른 고사 세포들을 flow cytometry로 분석하고 감별 측정함으로써 항암 요법제의 투여와 관련된 세포사의 기전을 이해하고 고사 분획의 측정이 항암화학 요법제의 투여전 약제 감수성의 지표로 이용 가능성이 있는지를 알아보고자 본 연구를 계획하였다. 연구 방법 : OVCAR-3 난소암 세포주에서 대조군을 포함하여 20 nM 또는 30 nM의 taxol을 가하고 24시간과 48시간 동안 배양한 후 세포들을 수확하였다. 실험 (1). 1x105개의 세포가 들어 있는 시험관에 annexin V-FITC와 propidium iodide (이하 PI)를 가한 후 배양하고 이와 병행하여 다른 하나의 시험관의 세포에는 DNA 염색을 위해 PI를 가하고 배양하였다. 실험 (2). 1x105개의 세포가 들어 있는 시험관에 annexin V-FITC와 cytokeratin (CAM5.2와 MNF116)을 가하고 배양한 후에 1% paraformaldehyde 용액과 100% methanol 용액으로 세포를 고정하고 침투시켰으며, 다음에 GAM IgG1-PE 또는 GAM IgG2a-PE 항체를 가하고 다시 배양하였으며, 이어서 PI에 의한 DNA의 염색을 실시하였다. 실험 (1)과 (2)에서 염색된 세포들을 표준 FACScan flow cytometer로 분석하였다. 결과 : (1) OVCAR-3 세포주에서 20 nM과 30 nM의 taxol의 투여로 G2M 분기의 정지되었으며, 24시간과 48시간으로 배양 시간이 증가함에 따라 그 정도는 급격히 증가하였으며, 그 증가의 정도는 20 nM의 taxol 투여에 비하여 30 nM의 taxol 투여의 경우에 현저히 증가되었다.(2) DNA 분절화와 고사를 뜻하는 G0G1 전분기 분획이 대조군으로부터 24시간 및 48시간으로 taxol과의 배양 시간이 증가됨에 따라 증가되었다.(3) Annexin V-FITC 양성과 PI 음성으로 표현된 조기 고사 세포의 출현은 대조군에 비하여 taxol의 투여 후 24시간 동안 배양한 경우로부터 배양 시간이 48시간으로 증가됨에 따라 점차 증가하였다.(4) 30 nM의 taxol을 투여한 후 조기 고사 세포를 감별 측정하기 위해 annexin V-FITC와 cytokeratin (CAM5.2 및 MNF116)의 염색과 연속적으로 DNA 함량을 위한 PI 염색을 동시에 실시한 연구에서 조기 고사 세포 (annexin V 양성 및 cytokeratin 음성)의 출현은 대조군으로부터 24시간 및 48시간 동안 배양 시간이 증가됨에 따라 증가되었으나 그 증가 정도는 20 nM의 taxol을 투여하고 annexin V-FITC와 PI의 염색으로 측정된 결과에 비하여 낮았다.
#Taxol #Annexin-V #Propidium iodide #Flow cytometry #Apoptosis

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