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자료유형
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저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제20권 제3호
발행연도
2010.1
수록면
550 - 557 (8page)

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Escherichia coli (E. coli) heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) was regarded as one of the most powerful mucosal immunoadjuvants eliciting strong immunoresponse to coadministered antigens. In the research, the high-level secretory expression of functional LTB was achieved in P. pastoris through high-density fermentation in a 5-l fermentor. Meanwhile, the protein was expressed in E. coli by the way of inclusion body, although the gene was cloned from E. coli. Some positive yeast and E. coli transformants were obtained respectively by a series of screenings and identifications. Fusion proteins LTB-6× His could be secreted into the supernatant of the medium after the recombinant P. pastoris was induced by 0.5% (v/v) methanol at 30oC,whereas E. coli transformants expressed target protein in inclusion body after being induced by 1 mM IPTG at 37oC. The expression level increased dramatically to 250-300 mg/l supernatant of fermentation in the former and 80-100 mg/l in the latter. The LTB-6× His were purified to 95% purity by affinity chromatography and characterized by SDS-PAGE and Western blot. Adjuvant activity of target protein was analyzed by binding ability with GM1gangliosides. The MW of LTB-6× His expressed in P. pastoris was greater than that in E. coli, which was equal to the expected 11 kDa, possibly resulted from glycosylation by P. pastoris that would enhance the immunogenicity of co-administered antigens. These data demonstrated that P. pastoris producing heterologous LTB has significant advantages in higher expression level and in adjuvant activity compared with the homologous E. coli system.
#rLTB #characterization #expression and purification #P. patoris #E. coli

목차

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참고문헌 (21)

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Amin, T / 1994 / Purification of the B-subunit oligomer of Escherichia coli heat-labile enterotoxin by heterologous expression and secretion in a marine vibrio / Protein Expr google schola Cregg, J. M / 1987 / High-level expression and efficient assembly of hepatitis B surface antigen in the methylotrophic yeast / Pichia pastoris. BioTechnology 5 : 479 ~ 485 google schola Cregg, J. M / 1993 / Recent advances in the expression of foreign genes in Pichia pastoris / BioTechnology 11 : 905 ~ 910 google schola Douce, G / 1995 / Mutants of Escherichia coli heat-labile toxin lacking ADP-ribosyltransferase activity act as nontoxic, mucosal adjuvants / Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A : 1644 ~ 1 google schola Douce, G / 1997 / Intranasal immunogenicity and adjuvanticity of sitedirected mutant derivatives of cholera toxin / Infect. Immun 65 : 2821 ~ 2828 google schola

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