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Tyrosine phenol-lyase (TPL) is a useful enzymefor the synthesis of pharmaceutical aromatic amino acids. Inthe current study, sequential DNA shuffling and screeningwere used to enhance the stability of TPL. Twenty-thousandmutants were screened, and several improved variants wereisolated. One variant named A13V, in which the 13th aminoacid alanine was substituted by valine, exhibited a highertemperature and denaturant stability than the wild-type TPL.The purified mutant TPL, A13V, retained about 60% of itsactivity at 76oC, whereas the activity of the wild-type TPLdecreased to less than 20% at the same temperature. Plus,A13V exhibited about 50% activity with 3 M urea, while thewild-type TPL lost almost all its catalytic activity, indicatingan increased denaturant tolerance in the mutant A13V. It isspeculated that the substitution of Val for the Ala in theb-strand of the N-terminal arm was responsible for theheightened stabilization, and that the current results willcontribute to further research on the structural stability ofTPL.

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