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저널정보
한국미생물생명공학회 한국미생물·생명공학회지 한국미생물·생명공학회지 제32권 제2호
발행연도
2004.1
수록면
110 - 116 (7page)

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B. thuringiensis subsp. kurstaki HD1 살충성 결정체 단백질 icp유전자를 클로닝하여 두개의 클론 pHLN1-80(+) 및 pHLN2-80(-)을 제조하였으며, pHLN1-80(+) 클론에는 icp유전자의 전사개시부위가 정방향으로 클론이 되었고, icp유전자 프로모터의 일부인 -80 bp를 가지고 있고, pHLN2-80(-) 클론은 icp유전자의 전사개시부위가 역방향으로 클로닝이 되었다. 상기 두 클론을 대장균에서 발현을 조사한 결과 icp유전자가 역으로 삽입된 pHLN2-80(-) 클론은 pHLN1-80(+) 클론보다 ICP 발현량이 현격히 증가하는 것을 확인하였다. pHLN2-80(-) 플라스미드에서의 -80 bp 프로모터에서 SD서열(-14 bp sequences) 상류부위를 제거한 후 동일한 살충성 결정체 단백질 icp유전자의 과다발현 현상이 일어나는지 조사하기 위해 icp유전자가 역방향으로 클로닝된 pHLRBS1-14와 icp유전자가 정방향으로 클로닝된 pHLRBS2-14 클론을 제조하였다. 또한 상이한 클로닝 운반체에서도 과다 발현이 일어나는지를 보기위하여 pHLN1-80(+)과 pHLN2-80(-) 플라스미드에서와 동일한 구조가 되도록 icp유전자를 pUC18과 pUC19플라스미드에 각각 클로닝하여 pHLNUC1-80과 pHLNUC2-80 클론을 제조하였다. pHLRBS1-14과 pHLRBS2-14클론을 대장균에서 발현을 시킨 후에 파쇄하여 SDS-PAGE와 Western blot으로 분석을 한 결과는 클론 pHLRBS1-14는 클론 pHLRBS2-14보다 많은 양의 ICP를 생산하였고, pHLRBS1-14는 pHLN2-80(-)클론 보다는 적게 ICP를 생산하였다. 이러한 발현 현상은 -80 bp promoter에서 결실된 SD서열의 상류부위가 발현에 직접적인 영향을 주고 있다는 것을 의미 한다. pHLNUC1-80이 역방향으로 클로닝된 pHLNUC2-80 클론보다 적게 ICP의 발현을 하였다. 이 결과는 상기 클론이 icp유전자 과다발현이 특정 클로닝 운반체에만 국한되어 일어나는 것이 아니며 유전자와 프로모터 간의 구조적 배열에 의하거나 프로모터에 있는 transcription-supressing regions이 교란되어서 일어난 것임을 시사한다. 그러나 왜 전사개기부위가 역삽입의 경우에 과다발현이 되는지 아직은 판단하기 어려우며 앞으로 더욱 연구를 계속하여야 할 과제로 남아있다.
#B. thuringiensis #over-expression #insecticidal protein gene #endotoxin crystal

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/ 1974 / Physiology of sporeforming bacteria association with insects Minimal nutritional requirements for growth and parasporal crystal formation of Bacillus thuringiensis google schola / 1976 / Electron microscope study of sporulation and parasporal crystal formation in Bacillus thuringiensis : 1472 ~ 1481 google schola / 1979 / A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA : 1513 ~ 1523 google schola / 1981 / Cloning and expression of the Bacillus thuringiensis crystal protein gene in Escherichia coli : 2893 ~ 2897 google schola / 1981 / Cloning and localization of the lepidopteran protoxin gene of Bacillus thuringiensis subsp : 6065 ~ 6069 google schola

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