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Somayeh Sadeghi (Pasteur Institute of Iran) Negar Seyed (Pasteur Institute of Iran) Mohammad-Hossein Etemadzadeh (Pasteur Institute of Iran) Saeid Abediankenari (Mazandaran University of Medical Sciences) Sima Rafati (Pasteur Institute of Iran) Tahereh Taheri (Pasteur Institute of Iran)
저널정보
대한기생충학열대의학회 Parasites, Hosts and Diseases The Korean Journal of Parasitology Vol.53 No.4
발행연도
2015.8
수록면
385 - 394 (10page)

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Leishmaniasis is a worldwide uncontrolled parasitic disease due to the lack of effective drug and vaccine. To speed up effective drug development, we need powerful methods to rapidly assess drug effectiveness against the intracellular form of Leishmania in high throughput assays. Reporter gene technology has proven to be an excellent tool for drug screening in vitro. The effects of reporter proteins on parasite infectivity should be identified both in vitro and in vivo. In this research, we initially compared the infectivity rate of recombinant Leishmania major expressing stably enhanced green fluorescent protein (EGFP) alone or EGFP-luciferase (EGFP-LUC) with the wild-type strain. Next, we evaluated the sensitivity of these parasites to amphotericin B (AmB) as a standard drug in 2 parasitic phases, promastigote and amastigote. This comparison was made by MTT and nitric oxide (NO) assay and by quantifying the specific signals derived from reporter genes like EGFP intensity and luciferase activity. To study the amastigote form, both B10R and THP-1 macrophage cell lines were infected in the stationary phase and were exposed to AmB at different time points. Our results clearly revealed that the 3 parasite lines had similar in vitro infectivity rates with comparable parasite-induced levels of NO following interferon-γ/lipopolysaccharide induction. Based on our results we proposed the more reporter gene, the faster and more sensitive evaluation of the drug efficiency.
#Leishmania major #EGFP #luciferase #amphotericin B #MTT #nitric oxide

목차

Abstract
INTRODUCTION
MATERIALS AND METHODS
RESULTS
DISCUSSION
REFERENCES

참고문헌 (33)

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[학술지(정기간행물)] - Alvar J / 2012 / Leishmaniasis worldwide and global estimates of its incidence / PLoS One 7 : e35671 ~ google schola [학술지(정기간행물)] - Papadopoulou B / 2003 / Stage-specific regulation of gene expression in Leishmania / ASM News, American Society for Microbiology 69 : 282 ~ 288 google schola [학술지(정기간행물)] - Gantt KR / 2001 / Oxidative responses of human and murine macrophages during phagocytosis of Leishmania chagasi / J Immunol 167 : 893 ~ 901 google schola [학술지(정기간행물)] - Garg R / 2005 / Immunostimulatory cellular responses of cured Leishmania-infected patients and hamsters against the integral membrane proteins and non-membranous soluble proteins of a recent clinical isolate of Leishmania donovani / Clin Exp Immunol 140 : 149 ~ 156 google schola [학술지(정기간행물)] - Holzmuller P / 2002 / Nitric oxide-mediated proteasome-dependent oligonucleosomal DNA fragmentation in Leishmania amazonensis amastigotes / Infect Immun 70 : 3727 ~ 3735 google schola

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