Establishment of an Agrobacterium-mediated genetic transformation and CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis of haploid inducer genes in Pak-choi plants (Brassica rapa ssp. chinensis)

김영천; Thu May Phyo; Rahman Falguni Maliha; 윤영재; Jang Jin Hoon; 이옥란; 이정환

doi:10.1007/s11816-024-00898-1

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자료유형: 학술저널

저자정보: 김영천 (전북대학교) Thu May Phyo (Department of Life Sciences, Jeonbuk National University, 567 Baekje-daero, Deokjin-gu, Jeollabuk-do 54896, Jeonju, Korea) Rahman Falguni Maliha (Department of Life Sciences, Jeonbuk National University, 567 Baekje-daero, Deokjin-gu, Jeollabuk-do 54896, Jeonju, Korea) 윤영재 (전북대학교) Jang Jin Hoon (Department of Applied Plant Science, College of Agriculture and Life Sciences, Chonnam National University, Gwangju 61186, Korea) 이옥란 (전남대학교) 이정환 (전북대학교)

저널정보: 한국식물생명공학회 Plant Biotechnology Reports Plant Biotechnology Reports Vol.18 No.2

발행연도: 2024.4

수록면: 263 - 273 (11page)

DOI: 10.1007/s11816-024-00898-1

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Pak-choi (Brassica rapa ssp. chinensis) is a popular vegetative crop in southern China, East Asia, and Southeast Asia. Owing to the threat of climate change, rapid breeding strategies for vegetable cultivars that are tolerant to abiotic and biotic stresses are required. Thus, the rapid fixation of useful agronomic traits using doubled haploid technology is urgent. The haploid- inducer gene is key to doubled haploidization. Two known CENH3 and pPLAIIγ genes, in which altered or partially deleted forms lead to haploid induction, were selected, and direct editing of Pak-choi CENH3 and pPLAIIγ genes (BcCENH3 and BcpPLAIIγ) was conducted using an Agrobacterium-mediated CRISPR/Cas9 system. First, BcCENH3 and BcpPLAIIγ genes were characterized by analyzing the spatial expression patterns and subcellular localization. The CENH3 expression levels in carpels and pPLAIIγ in various parts of Pak-choi flowers were higher than those of other parts. BcCENH3 and BcpPLAIIγ proteins targeted in the nucleus and plasma membrane, respectively. Whole plants were successfully regenerated from the shoot apical meristem (SAM) regions of Pak-choi seedlings using the optimized procedure and culture conditions. The regeneration results of SAM explants after Agrobacterium-mediated transformation of constructs expressing CRISPR/Cas9 and BcCENH3 or BcpPLAIIγ sgRNAs confirmed four independent BcCENH3-targeted transgenic lines with 2.1%, 1.8%, 1.8%, and 1.7% INDEL frequencies, and three independent BcpPLAIIγ-targeted transgenic lines with 24.5%, 33.7%, and 33.0% INDEL frequencies. Thus, our results suggested the possibility of developing transgenic Pak-choi lines by applying the CRISPR/Cas9 genome editing technology to BcCENH3 and BcpPLAIIγ as two haploid-inducer genes.

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