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자료유형
학술저널
저자정보
한아름 (농촌진흥청 국립농업과학원) 한범수 (농촌진흥청 국립농업과학원)
저널정보
한국국제농업개발학회 한국국제농업개발학회지 한국국제농업개발학회지 제28권 제1호
발행연도
2016.1
수록면
65 - 72 (8page)

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본 연구에서는 뇌졸중과 심근경색 등의 치료제로 널리 사용되어지고 있는 혈전용해제 t-PA를 벼 종자에서 생산하기위해 t-PA 유전자를 벼의 코돈 이용 최적화에 맞게 합성하였고 벼 종자 추출물에서 정제를 용이하게 하기 위하여 His6tag을 붙인 벡터를 제작하여 벼 종자 내에서 혈전용해제 t- PA를 생산 하였다. 또한 벼 염색체 내에 t-PA 유전자 삽입, 전사확인, 인공혈전 용해 활성과 분자량의 등의 생화학적 특성을 구명하였다. 1. 합성 t-PA와 t-PAHis6 유전자의 벼 염색체 내의 삽입 수를 서던블랏 분석법으로 측정한 결과, 합성 t-PA 유전자와 t- PAHis6로 형질전환된 벼에서 각각 1 ~ 6개과 1 ~ 3개의 유전자가 삽입되어 있음을 확인 하였다. 또한 t-PA의 전사는 RTPCR을통해 1.6 kb의 PCR 산물이 확인되어 벼 종자 내에서정상적인 전사가 이뤄지고 있음을 알 수 있었다. 2. 형질전환된 벼 종자의 전체 수용성 단백질 중 t-PA 단백질 평균 발현양은 2,113 ng/mg (st-PA)과 1,805 ng/mg (t-PAHis6) 으로 측정되었으며 가장 높은 발현양은 합성 t-PA로 형질전환체에서 2,916 ng/TSPmg을 나타내었다. 3. 벼 종자 추출물 내에 존재하는 재조합 t-PA 효소의 섬유소 분해 활성은 동물세포에서 생산된 재조합 t-PA 효소와 동등함을 관찰할 수 있었고, 재조합 t-PA 효소의 섬유소 용해활성은 평균 0.36 cm2 lysis zone (st-PA) 과 0.89 cm2 lysis zone (t-PAHis6)로 측정 되었다. 그러나 최대의 섬유소 용해도는1.8 cm2 lysis zone (st-PA)로 st-PA 그룹에서 약간 높았다. 4. SDS-PAGE 전기영동을 통한 재조합 합성 t-PA과 t- PAHis6의 분자량을 측정한 결과, 동물세포 유래 재조합 t-PA 효소와 유사한 크기인 65 kDa이였다.

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