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저자정보
강신웅 (한국인삼연초연구원 원료연구부) 이영기 (한국인삼연초연구원 원료연구부) 박성원 (한국인삼연초연구원 원료연구부) 한규웅 (한남대학교 생물학과) 김선원 (한국인삼연초연구원 원료연구부) 이종철 (한국인삼연초연구원 원료연구부) 이청호 (한국인삼연초연구원 원료연구부)
저널정보
한국연초학회 한국연초학회지 한국연초학회지 제23권 제2호
발행연도
2001.1
수록면
123 - 132 (10page)

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In order to transform pokeweed antiviral protein cDNA to tobacco plant, total RNA was extracted from Phytolacca americana. PAP-II cDNA was synthesized from purified total RNA via RT-PCR and subcloned to recombinant vector pBluescript II SK-. 10 deletion mutant PAP-II cDNA fragments which were sequentially deleted from N-terminal by 90bp were synthesized from PAP-II cDNA except leading frame by PCR with primers designed in our laboratory. To select non-cytotoxic clone, pAc55M was constructed with yeast expression vector pAc55 and multicloning site(MCS). Sequentially deleted mutant PAP-II cDNAs were cloned on downstream of gall promoter of pAc55M. 6 non-cytotoxic deletion mutant PAP-II cDNA were selected. Selected cDNAs were cloned into plant expression vector pKGT101BH for transformation of these clones to plant through Agrobacterium tumefacience. After cloning, recombinant pKGT101BH carrying deleted mutant PAP-IIcDNA were transformed to Nicotiana tabacum cv. NC567. Transformed tobacco plants cultured on shooting and rooting media were transfered to green-house. About four weeks later, these plants were infected with physically infection using carborandum with PVY-VN strain. After 4 weeks, plants resistant to virus were selected , and seeds of these plants were gathered. Southern blot hybridization showed deleted fragments by 220bp and 420bp, so resistant ability of these plants is due to mutant PAP-II cDNA.
#tobacco #RT-PCR #PAP-II #Phytolacca americana #PVY resistant

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