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자료유형
학술저널
저자정보
Yoo, Byoung-Kwon (Lab. of Pharmacology, College of Pharmacy and Institute for Molecular Biology and Genetics, Seoul National University) Lee, Sang-Bong (Laboratory of Cell Signaling, National heart, Lung and Blood Institute, National Institutes, of Health) Shin, Chan-Young (Lab. of Pharmacology, College of Pharmacy and Institute for Molecular Biology and Genetics) Kim, Won-Ki (Department of Pharmacology, College of Medicine, Division of Neuroscience, medical Research Center, Ewha Womans University) Kim, Sung-Jin (Department of Pharmacology, School of Dentistry, Kyung-Hee University) Kwang, Ho-Ko (Lab. of Pharmacology, College of Pharmacy and Institute for Molecular Biology and Genetics, Seoul National University)
저널정보
한국응용약물학회 The journal of applied pharmacology : the official journal of the Korean Society of Applied Pharmacology The journal of applied pharmacology : the official journal of the Korean Society of Applied Pharmacology 제8권 제2호
발행연도
2000.1
수록면
153 - 159 (7page)

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A novel serine/threonine protein phosphatase with EF-hand motif, which belongs to PPEF family was partially cloned from rat brain cDNA by employing RT-PCR method. The size of the amplified clone was 1.6kbp. The amplified DNA was subcloned into pGEM-T-Easy vector and the resulting plasmid was maned as pGEM-rPPEF2. The nucleuotide sequence is shared by 88% with that of mouse PPEF-2 cDNA, and the deduced amino acid sequence reveal 92% homology with that of mouse PPEF-2 cDNA. The N-terminal region of the cloned rat brain PPEF contains a putative phosphatase catalytic domain (PP domain) and the C-terminal region contains multiple $Ca^{2+}$ binding sites (EF region). The putative catalytic domin (PP) and the EF-hand motif (EF) regions were subcloned into pGEX4T-1 and were overexpressed in E. coli DH5 as glutathione-S-transferase (GST) fusion proteins. Expression of the desired fusion protein was identified by SDS-PAGE and also by immunoblot analysis using monoclonal antibody against GST. The recombinant proteins were purified by glutathione-agarose chromatography. This report is first to demonstrate the cloning of PPEF family from rat brain tissues. The clone reported here would be invaluable for the investigation of the role of this new type-phosphatase in rat brain.
#PPEF #cloning #sequence homology #GST fusion protein #overexpression #purification

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