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논문 기본 정보

자료유형
학술저널
저자정보
저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제25권 제3호
발행연도
2015.1
수록면
386 - 392 (7page)

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A novel recombinant bacmid, bEasyBm, that enables the easy and fast generation of pure recombinant baculovirus without any purification step was constructed. In bEasyBm, attR recombination sites were introduced to facilitate the generation of a recombinant viral genome by in vitro transposition. Moreover, the extracellular RNase gene from Bacillus amyloliquefaciens, barnase, was expressed under the control of the Cotesia plutellae bracovirus early promoter to negatively select against the nonrecombinant background. The bEasyBm bacmid could only replicate in host insect cells when the barnase gene was replaced with the gene of interest by in vitro transposition. When bEasyBm was transposed with pDualBac-EGFP, the resulting recombinant virus, EasyBm-EGFP, showed high levels of EGFP expression efficiency compared with that of non-purified recombinant virus BmGOZA-EGFP, which was constructed using the bBmGOZA system. In addition, nonrecombinant backgrounds were not detected in unpurified EasyBm-EGFP stocks. Based on these results, a high-throughput system for the generation of multiple recombinant viruses at a time was established.
#Baculovirus expression system #EasyBm #in vitro transposition #barnase #high throughput

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참고문헌 (18)

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Airenne KJ / 2003 / Improved generation of recombinant baculovirus genomes in Escherichia coli / Nucleic Acids Res 31 : e101 ~ google schola Choi JY / 2000 / High-level expression of canine parvovirus VP2 using Bombyx mori nucleopolyhedrovirus vector / Arch. Virol 145 : 171 ~ 177 google schola Choi JY / 2009 / Analysis of promoter activity of selected Cotesia plutellae bracovirus genes / J. Gen. Virol 90 : 1262 ~ 1269 google schola Choi JY / 2012 / Fast and efficient generation of recombinant baculoviruses by in vitro transposition / Appl. Microbiol. Biotechnol 96 : 1353 ~ 1360 google schola Hartley RW / 1989 / Barnase and barstar - 2 small proteins to fold and fit Together / Trends Biochem. Sci 14 : 450 ~ 454 google schola

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