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논문 기본 정보

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학술저널
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저널정보
한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제15권 제2호
발행연도
2005.1
수록면
310 - 320 (11page)

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A membrane-based oligonucleotide array wasused to detect predominant bacterial species in human fecalsamples. Digoxygenin-labeled 16S rDNA probes were generatedby PCR from DNA that had been extracted from fecal samplesor slurries. These probes were hybridized to an array of 120oligonucleotides with sequences specific for 40 differentbacterial species commonly found in human feces, followedby color development using an alkaline phosphatase-conjugatedantibody and NBT/BCIP. Twenty of the species were detectedby this method, but E. coli, which was present at ~1×105 CFUper gram feces, was not detected. To improve the sensitivityof this assay, reverse transcriptase-PCR was used to generateprobes from RNA extracted from fecal cultures. Coupledwith a chemiluminescence detection method, this approachlowered the detection limit for E. coli from ~1×106 to ≤1×105.These results indicate that the membrane-array method withreverse transcriptase-PCR and chemiluminescence detectioncan simultaneously identify bacterial species present in fecalsamples at cell concentrations as low as ≤1×105 CFU per gram.

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