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저자정보
저널정보
한국식물생명공학회 Plant Biotechnology Reports Plant Biotechnology Reports 제9권 제1호
발행연도
2015.1
수록면
27 - 36 (10page)

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A protocol of plant regeneration from shoot tipsand optimization of Agrobacterium tumefaciens-mediatedtransformation of broccoli (Brassica oleracea var. italica)cv. Green Marvel have been developed. Shoot tip responsewas assessed on Murashige and Skoog (MS) mediumsupplemented with different concentrations of zeatin. Thehighest regeneration with a maximum of 13 shoots perexplant was obtained on MS medium containing1.5 mg l-1 zeatin. Primary selection of putative transformedexplants was performed on the optimized regenerationmedium (MS medium containing 1.5 mg l-1 zeatinand 80 mg l-1 kanamycin) for 60 days. The effects of preculture,acetosyringone and growth of bacterial culturewere studied. Explants precultured on callus inductionmedium for 4 days prior to inoculation with A. tumefacienswith 200 lM acetosyringone resulted in improved transformationfrequency. The Agrobacterium culture dilutionof 1:5 and inoculation time of 30 min increased the efficiencyof transformation of shoot tip explants. The resultsalso indicated that 150 mg l-1 ampicillin alone was adequateto eradicate Agrobacterium growth in the SRMincorporated with the respective minimum inhibitory concentrationof 80 mg l-1 kanamycin. The polymerase chainreaction (PCR) and Southern blot assays confirmed thetransgenic status of the broccoli cv. Green Marvel regenerants. A transformation efficiency of 5 % was achievedbased on the positive PCR results using the optimized procedure. The expression of luciferase reporter gene in thetransformed cells and the transcription of AtHSP101 usingRT-PCR further confirmed the transgenic status of theregenerated plants.
#Broccoli AtHSP101 Luciferase gene Southern blot Agrobacterium tumefaciens

목차

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Byung-Whan Min / 2007 / Successful genetic tr google schola Cao J / 2003 / Transgene expression in broccoli (Brassica oleracea var. italica) clones propagated in vitro via leaf explants / Plant Cell Rep 21 : 789 ~ 796 google schola Cardoza V / 2003 / Increased Agrobacterium mediated transformation and rooting efficiencies in canola (Brassica napus L.) from hypocotyl explants / Plant Cell Rep 21 : 599 ~ google schola Cardoza V / 2006 / Agrobacterium protocols, Canola (Brassica napus L.) / Meth Mol Biol 343 (4) : 257 ~ 266 google schola Doyle JJ / 1990 / Isolation of plant DNA from fresh tissue / Focus 12 : 13 ~ 15 google schola

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