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논문 기본 정보

자료유형
학술저널
저자정보
저널정보
한국식물생명공학회 Journal of Plant Biotechnology Journal of Plant Biotechnology 제35권 제1호
발행연도
2008.1
수록면
87 - 94 (8page)

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Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) is an infectious and highly contagious virus of swine. In order to develop the transgenic tobacco culture cells producing PEDV antigen protein, four vectors expressing PEDV spike protein (SP) gene under the control of a CaMV 35S promoter were constructed. Four fragments of the SP region of PEDV, SP1 (444 bp, 1487-1930 bp), SP2 (1.7 kb, 2300-3987 bp), SP3 (1.4 kb, 1559-2950 bp), and SP4 (2.6 kb, 9-2643 bp) were amplified by PCR and then C-MYC tag was fused to the end of each SP gene, respectively. These cassettes are inserted into the pCAMBIA2300 (named as 35S::SP1-M, 35S::SP2-M 35S::SP3-M, and 35S::SP4-M, respectively). Tobacco (cv. BY-2) cultured cells were transformed by co-cultivation with Agrobacterium tumefaciens harboring expression vector. We selected kanamycin-resistant calli and checked for the presence of the introduced SP gene using PCR, resulting 70% of them showed the foreign gene. We selected the lines with high-level expression of PEDV antigen protein based on dot blot analysis. Southern blot analysis confirmed that the PEDV SP gene was integrated into the genome of the tobacco cultured cells. Northern blot analysis showed that the introduced gene was highly expressed in transgenic cultured cells. Transgenic tobacco cultured cells-derived antigen induced immunogenicity in mice as determined by a plaque reduction neutralization assay. These results suggest that the vectors expressing PEDV spike protein gene in this study will be useful for the development of transgenic plants and cultured cells producing PEDV antigene protein.

목차

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참고문헌 (13)

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Bae J. L. / 2003 / Induction of antigen-specific systemic and mucosal immune responses by feeding animals transgenic plants expressing the antigen / Vaccine 21 : 4052 ~ 4058 google schola Chang S. H. / 2002 / Identification of the epitope region capable of inducing neutralizing antibodies against the porcine epidemic diarrhea virus / Mol Cells 14 : 295 ~ 299 google schola Hellwig S. / 2004 / Plant cell cultures for the production of recombinant proteins / Nat Biotech 22 : 1415 ~ 1422 google schola Kang T. J. / 2004 / High-level expression of the neutralizing epitope of porcine epidemic diarrhea virus by a tobacco mosaic virus-based vector / Protein Expr Purif 38 : 129 google schola Kang T. J. / 2005 / Cloning and sequence analysis of the Korean strain of spike gene of porcine epidemic diarrhea virus and expression of its neutralizing epitope in plants / google schola

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