지원사업
학술연구/단체지원/교육 등 연구자 활동을 지속하도록 DBpia가 지원하고 있어요.
커뮤니티
연구자들이 자신의 연구와 전문성을 널리 알리고, 새로운 협력의 기회를 만들 수 있는 네트워킹 공간이에요.
이용수
초록· 키워드
오류제보하기
Biotin에 강한 결합 친화력(KD = 10<SUP>-14</SUP> M)과 함께 streptavidin의 tetramer 특징은 VHH 항체를 streptavidin에 융합시키게 하여 biotinylated horseradish peroxidase를 사용하는ELISA 와Western blot analysis 등의 면역분석법에서 VHH 항체의 항원결합력을 증가시키는데 응용 가능하다. 이를 응용하기 위해 우리는 Streptomyces avidinii 염색체 DNA로부터 PCR을 통해 streptavidin유전자를 증폭하고 이를 green fluorescent protein항원에 특이적으로 결합하는 8B9 VHH 항체유전자에 융합시켰다. 대장균에서 수용성 융합단백질로 발현시키기 위해 pUC119 플라스미드에 기초한 발현시스템을 사용하였다. 즉 lacZ promoter를 사용하여 IPTG에 의해 단백질발현을 유도하게 하였으며, 아미노말단에 pelB leader를 두어 발현된 단백질의 periplasmic space로 이동하게 하여 수용성 단백질형태의 분비를 촉진하였으며 카르복시말단에 6개의 polyhistidine tags를 두어 Ni⁺-NTA-agarose column을 사용하여 발현된 단백질을 정제하였다. Streptavidin이 biotin에 강하게 결합함으로 대장균에 독성을 나타냄에도 불구하고 본 수용성 융합단백질은 성공적으로 발현되었다. SDS-PAGE에서 가열하는 경우 변성되어 30.6 kDa를, 가열하지 않는 경우에는 자연 상태의 122.4 kDa을 나타내었다. 이는 8B9 VHH항체에 융합된 streptavidin moiety에 의해 monomer subunit가 비공유결합으로 tetramerization됨을 제시해준다. 또한 본 융합단백질은 ELISA와 Westernblot analysis에서 보여진 것처럼 parental streptavidin과 유사한 biotin결합력과 green fluorescent protein항원 결합력을 모두 나타내었다. 결론적으로 streptavidin에 융합된 8B9 VHH 항체형태의 융합단백질은 대장균에서 수용성 tetramer로 성공적으로 발현 및 정제되었으며 biotin과 green fluorescent protein 항원에 동시에 결합함으로써 tetrameric and bifunctional VHH 항체제조의 가능성을 제시해주었다.
목차
서론
재료 및 방법
결과
고찰
References
초록
참고문헌 (36)
참고문헌 신청
Arbabi-Ghahroudi, M., Desmyter, A., Wyns, L., Hamers, R., and Muyldermans, S. 1997. Selection and identification of single domain antibody fragments from camel heavy-chain antibodies. FEBS Lett. 414, 521-526.
Arbabi-Ghahroudi, M., Desmyter, A., Wyns, L., Hamers, R., nd Muyldermans, S. 1997. Selection and identification of ingle domain antibody fragments from camel heavy-chain ntibodies. FEBS Lett. 414, 521-526.
Cao, Y., Christian, S. and Suresh, M. R. 1998. Development f a bispecific monoclonal antibody as a universal immunoprobe or detecting biotinylated macromolecules. J. mmunol. Methods 220, 85-91.
Cao, Y., Christian, S. and Suresh, M. R. 1998. Development of a bispecific monoclonal antibody as a universal immunoprobe for detecting biotinylated macromolecules. J. Immunol. Methods 220, 85-91.
Diamandis, E. P. and Christopoulos, T. K. 1991. The biotin- (strept) avidin system: principles and applications in biotechnology. Clin. Chem. 37, 625-636.
함께 읽어보면 좋을 논문
논문 유사도에 따라 DBpia 가 추천하는 논문입니다. 함께 보면 좋을 연관 논문을 확인해보세요!
-
Streptavidin이 융합된 DR4 항원에 특이적인 single-chain Fv 항체의 개발
미생물학회지
2018 .12
-
수용성 streptavidin의 Escherichia coli 에서 기능적 발현
생명과학회지
2015 .06
-
Cmyc tag 펩타이드에 특이적인 9E10 VHH 나노바디의 개발
미생물학회지
2022 .09
-
대장균의 alkaline phosphatase가 융합된 anti-DR4 single-chain Fv (ScFv) 항체의 개발
미생물학회지
2016 .03
-
히스티딘으로 표지된 람다 박테리오파아지 꼬리 단백질 J와 대장균 K-12와의 결합
생명과학회지
2018 .01
-
제주지역 일개 종합병원에서 동정된 비예기항체의 실태조사
대한임상검사과학회지
2017 .01
-
AtCYP78A7 과발현 환경스트레스 내성 형질전환 벼의 단백질 진단 키트 개발
생명과학회지
2018 .07
-
Leucine zipper도메인의 융합에 의한 바이오시밀러 레미케이드 Single-chain Fv 항체의 항원 결합력 개선
생명과학회지
2020 .11
-
[읽기 쉬운 총설 ①] 인공지능을 활용한 단백질 구조 예측
화학세계
2023 .04
-
2020 단백질 섭취기준: 결핍과 만성질환 예방을 위한 한국인의 단백질 필요량 추정과 섭취현황
Journal of Nutrition and Health
2022 .02
-
융합연구가 나아가야 할 방향
한국분석과학회 학술대회
2019 .11
-
질량분석기를 활용한 막 단백질 비교분석: High-speed Centrifuge법과 Reagent-based법
대한임상검사과학회지
2019 .01
-
베이지안 계층적 모형을 이용한 역상 단백질 어레이 자료의 정량화 방법 : 실제 자료를 중심으로
Journal of The Korean Data Analysis Society
2016 .01
-
코로나와 함께하는 융합의 시대
진공이야기
2020 .09
-
황 기반의 단백질 정량분석법과 아미노산 기반의 단백질 정량분석법의 비교
한국분석과학회 학술대회
2018 .11
-
포랄루맙 항체와 자성나노입자 접합 구조체의 유체 내 이동속도 특성
새물리
2021 .11
-
Korea vaccinia viral vectored vaccine expressing 33 kDa fragment of Plasmodium vivax merozoite surface protein 1 elicited strong humoral immune responses in mice
미생물학회지
2021 .03
-
한국 아동 및 청소년의 단백질 섭취와 과체중 및 비만과의 연관성: 2014–2019년 국민건강영양조사 자료를 활용하여
Journal of Nutrition and Health
2023 .02
-
인간의 급성 비임파성 백혈암세포(HK60)의 표면항원에 결합하는 재조합 single-chain Fv (ScFv)의 개발
미생물학회지
2015 .06
-
청장년 한국인의 동물성, 식물성 단백질 섭취와 사회경제적 수준
Korean Journal of Health Promotion
2020 .01
이 논문의 저자 정보
최근 본 자료
댓글(0)
0