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논문 기본 정보

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저널정보
대한의생명과학회 대한의생명과학회지 대한의생명과학회지 제8권 제3호
발행연도
2002.9
수록면
107 - 113 (7page)

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Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) strains of serotype O157:H7 have been shown to colonize the intestinal epithelial cell by the attaching and effacing (AE) mechanism. The AE lesion is mediated by an intimin, of which production and expression are controlled by a 3-Kb eaeA gene located EHEC chromosomal DNA. If the eaeA gene is mutated, EHEC O157:H7 strains lose capacity of adhesion to intestinal epithelial cells. In this study, a 891 bp of the 3'-end region of a gamma intimin was amplified by polymerase chain reaction (PCR). The PCR product was inserted into pSTBlue-1 cloning vector and transformed into DE3 (BL21) competent cell. After plasmid mini-preparation and restriction enzyme digestion of eaeA/891-pSTBlue-1 vector, target eaeA gene was re-inserted into pET-28a expression vector and was transformed. Then the expression of recombinant eaeA/891 (891 bp) gene was induced by isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG). The expression of the 40-KDa recombinant protein was identified in SDS-PAGE and confirmed by immunoblotting using the HisㆍTag<SUP>®</SUP> and T?ㆍTag<SUP>®</SUP> monoclonal antibody. This recombinant protein expressed by eaeA gene could be applied in further studies on the mechanisms of E. coli O157:H7 infection and the development of recombinant vaccine.
#EHEC O157:H7 #Intimin #eaeA gene #PCR #Immunoblotting

목차

영어 초록
서론
재료 및 방법
결과
고찰
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