Effect of polar amino acid residue substitution by site-directed mutagenesis in the N-terminal domain of Pseudomonas sp. phytase on enzyme activity :Pseudomonas sp.로부터 유래된 Phytase의 N-terminal domain에서 부위지정 돌연변이에 의한 극성 아미노산 잔기의 치환이 효소 활성에 미치는 영향

이가혜

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자료유형: 학위논문

저자정보: 이가혜 (부경대학교, 부경대학교 대학원)

지도교수: 공인수

발행연도: 2020

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이용수1

이 논문의 연구 히스토리 (2)

2020

Effect of polar amino acid residue substitution by site-directed mutagenesis in the N-terminal domain of Pseudomonas sp. phytase on enzyme activity

이가혜 생물공학과 2020.01 학위논문

Effect of Polar Amino Acid Residue Substitution by Site-directed Mutagenesis in the N-terminal Domain of Pseudomonas sp. Phytase on Enzyme Activity

이가혜 , 장원제 , 김소영 외 2명 Journal of Microbiology and Biotechnology 2020.01 학술저널

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In aquatic environments with a neutral pH and low temperature, phytase used for decomposition of phytate should maintain high activity even at low temperatures. The N-terminal domain of the Pseudomonas sp. FB15 phytase which maintains high activity even at 25 °C increases low-temperature activity and catalytic efficiency. In this study, the three-dimensional structure of the N-terminal domain was predicted and substitutions for the amino acid residues of the region assumed to be the active site were made. The activity of mutants, in which alanine (A) was substituted for the original residue, was investigated at various temperatures and pH values. Significant differences in enzymatic activity were observed only in mutant E263A, suggesting that the amino acid residue at position 263 of the N-terminal domain is important in enzyme activity.

#Beta-propeller phytase #alkaline phytase #site-directed mutagenesis #phytate

1. Introduction 1
2. Materials and Methods 3
2.1. Three dimensional structural modeling 3
2.2. Bacterial strains, plasmids, media 3
2.3. Overlap PCR for site-directed mutagenesis 3
2.4. Overexpression and purification of recombinant proteins 4
2.5. Mutant phytases activity assay 4
2.6. Effects of temperature and pH on mutant phytase 4
3. Results 5
3.1. Three dimensional structural modeling 5
3.2. Site-directed mutagenesis and sequencing 5
3.3. Expression and purification of recombinant proteins 5
3.4. Effects of temperature and pH on mutant phytase 5
4. Discussion 7
5. References 16
Abstract (in Korean) 18
Acknowledgments 19

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