본 연구는 2년산, 4년산 상황버섯 원물의 외관 성상, 밀도, 경도, 색도와 같은 물리적 특성과 일반성분을 측정하였다. 추출물 제조는 2년산 상황버섯을 이용하여 추출시간과 추출용매에 따른 수율과 β-glucan 함량이 최대가 되는 적합한 추출 조건을 구하였다. 그 조건으로 2년산, 4년산 상황버섯 추출물을 제조하여, 단백질 및 총당 함량과 구성당을 분석하고, β-glucan, 총폴리페놀화합물, 총플라보노이드 함량을 측정하였으며, DPPH radical 소거 활성, FRAP, egg yolk LDL을 이용한 TBARS 방법으로 항산화활성을 측정하였다. 그리고 RAW264.7 macrophage를 이용한 세포 독성 및 NO 생성 억제 활성과 악성 흑색종을 유발하는 B16F10 세포주에 대한 세포 증식 억제 활성을 측정하여 비교하였다. 외관 성상은 2년산 상황버섯보다 4년산 상황버섯이 더 크고, 무거우며, 짙은 색을 띠었고, 밀도와 경도는 2년산 상황버섯보다 4년산 상황버섯이 높았다. 그리고 4년산 상황버섯이 황색도와 적색도가 더 높았으며, 일반성분에서는 수분, 조회분이 유의적으로 더 높게 나타났고, 이 외에 탄수화물, 조단백, 조지방에서는 유의적인 차이가 나타나지 않았다. 추출시간과 용매에 따른 수율 및 β-glucan 함량은 시간이 증가할수록 수율과 β-glucan 함량이 더 높았으나, 증가율은 높지 않아 추출시간은 24시간으로 하였으며, 추출용매에 따른 결과는 수율은 60% ethanol, pH 7 추출물이 11.74±0.17%로 가장 높았고, β-glucan 함량은 물, pH 4와 pH 7 추출물이 35.39±0.03, 35.27±0.64 g/100g으로 높았다. 따라서 상황버섯 추출물의 생리활성 측정은 물, pH 7 조건과 60% ethanol, pH 7 두 조건으로 추출하였다. 추출물의 수율은 2년산과 4년산 상황버섯이 유의적인 차이가 나타나지 않았으며, 물 추출물보다 60% ethanol 추출물이 더 높았다. β-glucan 함량은 2년산과 4년산 상황버섯 추출물이 유의적인 차이가 나타나지 않았고, 물 추출물의 경우 2년산, 4년산 상황버섯 추출물이 각각 35.27±0.64, 35.73±0.05 g/100g으로 60% ethanol보다 더 높았다. 단백질과 총당 함량은 4년산 상황버섯이 각각 62.38±0.69 mg/mL, 36.60±0.20 mg/mL로 더 높았으며, 물 추출물 보다 60% ethanol 추출물이 더 높았다. 구성당 분석은 모든 추출물에서 glucose가 검출되었으며, 60% ethanol 추출물보다 물 추출물에서 더 높게 나타났고, 2년산과 4년산 상황버섯의 유의적 차이는 나타나지 않았으며, fructose는 60% ethanol 추출물에서만 검출되었다. 항산화성분은 총폴리페놀화합물은 2년산과 4년산 상황버섯의 60% ethanol 추출물이 유의적 차이가 없었으며, 총플라보노이드 함량은 4년산 상황버섯 60% ethanol이 2.46±0.00 CE g/L로 2년산 상황버섯보다 더 높았다. 항산화활성은 DPPH와 FRAP, TBARS 모두 2년산보다 4년산 상황버섯이 활성이 높게 나타났다. RAW264.7에 대한 세포독성은 모든 추출물에서 나타나지 않았으며, NO 생성 억제 활성은 모든 추출물이 농도의존적으로 NO 생성량을 감소시켰고, 특히 2년산 상황버섯의 60% ethanol 추출물이 활성이 높았다. B16F10 세포주에 대한 암세포 증식 억제 활성은 12시간까지는 활성이 유사하였으나, 24시간에서는 4년산 상황버섯이 증식 억제 활성이 더 높았고, 물 추출물이 60% ethanol 추출물보다 활성이 높았다.
Phellinus baumii has been used as traditional oriental medicine for the treatment of cancer diseases due to their strong antioxidant, anti-inflammatory and anti-cancer activities. As to the biological activity of this Phellinus baumii, it is known that the longer as the cultivation period, the higher activities. The many farmhouses are cultivating 2∼5 years Phellinus baumii in order to produce the crop of the high added value. Therefore, the biological activity and physiochemical property of 2 years and 4 years Phellinus baumii and their extracts were measured to confirm this phenomenon. In the external appearance, the 4 years Phellinus baumii was bigger and heavier than the 2 years one, and had dark color. Density and hardness of the 4 years Phellinus baumii was higher than the 2 years one. Proximate compositions, moisture and crude ash of the 4 years Phellinus baumii were significantly higher than 2 years one, and other compositions were not observed with significant difference. The yield and β-glucan content depending on the extraction time and solvent were increased for 48 hr of extraction time. However, the increasing amount was not high. Thus, the extraction time was decided to 24 hr. As to yield according to the extraction solvent, 60% ethanol and pH 7 extract was the highest as 11.74±0.17%. In β-glucan contents, the water and pH 4, pH 7 extracts were high as 35.39±0.03, 35.27±0.64 g/100g. Therefore, the biological activities measurement was extracted with the water, pH 7 condition and 60% ethanol and pH 7. The yield of the extracts was not observed significant difference and 60% ethanol extracts was higher than the water extracts. In β-glucan contents, there was no significant differences. The water extracts was higher than 60% ethanol about 2 years and 4 years phellinus baumii extracts respectively as 35.27±0.64, 35.73±0.05 g/100g. In the protein and total sugar content, 4 years Phellinus baumii was higher as 62.38±0.69 mg/mL, 36.60±0.20 mg/mL. And 60% ethanol extracts were higher than the water extracts. Regarding sugar composition of Phellinus baumii, in all extracts, glucose was detected and appeared more highly in the water extracts more than 60% ethanol extracts. It didn''t show the significant difference between 2 years and 4 years Phellinus baumii. And fructose was detected from 60% ethanol extracts. In the total phenolic contents, 60% ethanol extracts of 2 years and 4 years Phellinus baumii didn''t have the significant difference. And the total flavonoid content was higher than 2 years Phellinus baumii about 60% ethanol of 4 years Phellinus baumii as 2.46±0.00 CE g/L. In the antioxidant activity, 4 years Phellinus baumii showed DPPH, FRAP and TBARS the activity more than 2 years Phellinus baumii altogether highly. The cytotoxicity about the RAW264.7 didn''t appear in all extracts. And all extracts, the NO production inhibiting activities reduced through the concentration-dependent. Especially the activity of 2 years Phellinus baumii 60% ethanol extracts was high. In the suppression activity of cancer cell proliferation about the B16F10 cell strain, the activity was similar at 12 hr. However, the activity of 4 years Phellinus baumii was higher in 24 hr. The water extracts was higher than 60% ethanol extracts about the activity.
Ⅰ. 서 론 1Ⅱ. 재료 및 방법 31. 실험재료 32. 시약 및 기기 33. 상황버섯의 재배 년수에 따른 원물의 특성 43.1. 물리적 특성 43.1.1. 외관 성상 조사 43.1.2. 밀도 측정 43.1.3. 경도 측정 53.1.4. 색도 측정 53.2. 일반성분 측정 54. 상황버섯의 재배 년수에 따른 추출물의 특성 64.1. 상황버섯 추출물의 제조 64.2. 추출 수율 측정 64.3. 단백질 및 총당 함량 측정 74.4. 구성당 분석 74.5. β-glucan 함량 측정 84.6. 항산화성분 측정 94.6.1. 총폴리페놀화합물 함량 94.6.2. 총플라보노이드 함량 94.7. 항산화활성 측정 104.7.1. DPPH free radical 소거활성 측정 104.7.2. Ferric ion reducing antioxidant power(FRAP) 측정 104.7.3. Low density lipoprotein(LDL) 산화 억제 활성 측정 114.7.3.1. Egg yolk LDL 분리 114.7.3.2. Egg yolk LDL 산화 114.7.3.3. Thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 측정 124.8. RAW264.7 macrophage를 이용한 항염증 활성 측정 134.8.1. RAW264.7 macrophage 배양 134.8.2. MTT assay를 이용한 세포 독성 측정 134.8.3. Nitric oxide(NO) 생성 억제 효과 측정 144.9. 암세포 증식 억제 활성 측정 155. 통계 처리 15Ⅲ. 결과 및 고찰 161. 상황버섯의 재배 년수에 따른 원물의 특성 161.1. 물리적 특성 161.1.1. 외관 성상 161.1.2. 밀도 및 경도 181.1.3. 색도 191.2. 일반성분 함량 202. 상황버섯의 재배 년수에 따른 추출물의 특성 212.1. 수율 및 β-glucan 함량 212.1.1. 추출시간에 따른 수율 및 β-glucan 함량 212.1.2. 추출용매에 따른 수율 및 β-glucan 함량 242.1.3. 재배 년수에 따른 수율 및 β-glucan 함량 262.2. 단백질 및 총당 함량 272.3. 구성당 함량 282.4. 항산화성분 292.5. 항산화활성 312.5.1. DPPH free radical 소거활성 및 FRAP 활성 312.5.2. TBARS 332.6. RAW264.7 macrophage를 이용한 항염증 활성 352.6.1. 세포독성 352.6.2. Nitric oxide(NO) 생성 억제 효과 372.7. B16F10에 대한 암세포 증식 억제 활성 392.7.1. 세포독성 392.7.2. Wound healing assay 41Ⅳ. 요 약 44참고문헌 46영문 초록 51