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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학위논문
- 저자정보
- 지도교수
- 이정신
- 발행연도
- 2015
- 저작권
- 강원대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
이용수3
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진핵세포의 크로마틴 구조의 dynamics에 있어서 뉴클레오좀을 이루고 있는 히스톤의 post-translational modification은 중요한 요소이다. 하나의 히스톤 modification이 다른 modification에 영향을 줄 수 있는 것을 ‘Histone crosstalk’이라 하고, 다양한 히스톤 crosstalk 중에서 가장 잘 알려진 것으로 히스톤 H2B monoubiquitination에 영향을 받는 히스톤 H3K4 methylation 있다. 지난 연구들에 따르면 히스톤 Lysine methyltransferase (HKMT) activity를 가지고 있는 SET1/COMPASS의 단백질 중 하나인Cps35/Swd2가 이 histone crosstalk 중요한 역할을 하고 있지만 구체적으로 무엇에 의하여, 어떻게 Set1의 activity를 조절할 수 있는 지에 대하여는 연구되어 있지 않아 있다.
따라서, 본 연구는 무엇이 H2B monoubiquitination에 의존적으로 Cps35/Swd2를 크로마틴에 결합시킬 수 있는 지 보기 위해, DSP-Affinity purification을 수행하였다. 그 결과E2 conjugating-enzyme인 Rad6가 가지고 있던 Ubiquitin을 자신의 기질에게 전달 시켜줄 수 있을 때에 Cps35/Swd2와 직접적으로 결합할 수 있고, 이 결합을 통해Cps35/Swd2가 크로마틴에 올 수 있어 Set1/COMPASS를 구성할 수 있음을 보여준다. 또 Cps35/Swd2가 결합할 수 없는 상태의 truncated-Set1에의한 H3K4me3에 대해서 ChIP-sequencing을 수행하여 Cps35S/Swd2는 Set1이 정확하게 promoter 근처 지역에 H3K4me3를 위치시키기 위해서 필요한 요소임을 보여주고, TAP-purification을 통해 Cps35/Swd2의 결합이 Set1의 stability 조절하는 데에 중요함을 보여준다.
따라서, 본 연구는 무엇이 H2B monoubiquitination에 의존적으로 Cps35/Swd2를 크로마틴에 결합시킬 수 있는 지 보기 위해, DSP-Affinity purification을 수행하였다. 그 결과E2 conjugating-enzyme인 Rad6가 가지고 있던 Ubiquitin을 자신의 기질에게 전달 시켜줄 수 있을 때에 Cps35/Swd2와 직접적으로 결합할 수 있고, 이 결합을 통해Cps35/Swd2가 크로마틴에 올 수 있어 Set1/COMPASS를 구성할 수 있음을 보여준다. 또 Cps35/Swd2가 결합할 수 없는 상태의 truncated-Set1에의한 H3K4me3에 대해서 ChIP-sequencing을 수행하여 Cps35S/Swd2는 Set1이 정확하게 promoter 근처 지역에 H3K4me3를 위치시키기 위해서 필요한 요소임을 보여주고, TAP-purification을 통해 Cps35/Swd2의 결합이 Set1의 stability 조절하는 데에 중요함을 보여준다.
목차
Ⅰ. 서 론Ⅱ. 재료 및 방법1.재 료2.Western blot3.Yeast transformation4.Affinity purification1)ANTI-FLAG Affinity purification2)ANTI-MYC Affinity purification3)Western blot5.DSP 처리6.Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) 및 quantitative real-time PCR (qPCR)7.Tandem Affinity Purification8.FOA selectionⅢ. 결 과1.Cps35/Swd2는 Rad6와의 직접적인 결합을 통하여 크로마틴에 결합할 수 있다.2.E2 Conjugating Enzyme인 Rad6가 Ubiquitin을 자신의 Substrate 에게 전달해주고 Cps35/Swd2와 결합할 수 있다.3.Cps35/Swd2 는 Rad6 가 있을 때 Leo1과 결합하여 Set1/COMPASS와 Paf1 complex의 결합을 촉진시켜준다.4.Cps35/Swd2의 조절을 필요로 하지 않는 Truncated Set1은 유전자의 잘못된 지역으로 H3K4 trimethylation을 일으킨다.5.Cps35/Swd2는 Set1의 RRM domain과 함께 Set1의 activity를 조절한다.6.Cps35/Swd2의 Dual function은 서로 독립적이지 않고, Set1의 기능에 영향을 미칠 수 있다.Ⅳ. 논 의Ⅴ. 참 고 문 헌Ⅵ. 영 문 초 록
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