잣나무는 수목 중에 중요한 자원 중 하나이며, 전통적인 약용 식물로서 피로 회복, 노화방지, 항균 효과가 있다고 보고되고 있는데, 특히 잣나무에 함유된 폴리페놀의 성분이 항산화작용을 통하여 활성산소를 제거함으로서 노화, 암 등 각종 질환을 예방하고 증상을 완화시켜 준다고 알려져 있다. 식물성 성분 중에서 생리활성 인자를 탐색할 목적으로 추출물에 의한 항산화 활성을 DPPH 소거활성법, SOD 유사활성법으로 측정하고, 총 폴리페놀함량과 총 플라보노이드 함량을 측정하였다. 또한 추출물의 항균활성을 Paper disc법과 주입평판법으로 측정하였다. 본 실험에서는 국내에 자생하는 잣잎(PL)과 잣껍질(PS)을 다양한 용매(ethanol, methanol, n-hexane)를 사용하여 추출하였고, PL과 PS의 총 폴리페놀 함량은 PL(E), PL(M), PL(N-H)은 각각 48.67%, 51.04%, 9.28% 이었으며, PS(E), PS(M), PS(N-H)은 각각 8.8%, 13.59%, 2.2%로 methanol > ethanol > n-hexane 순이었다. DPPH 소거활성법에서는 짙은 자색의 탈색되는 정도로 나타내는 전자공여능이 잣잎 추출물 PL(E), PL(M), PL(N-H)은 투입농도 1000 ppm에서 34%, 39%, 17%의 소거활성을 보였다. 잣껍질 추출물 PS(E), PS(M), PS(N-H)은 17~42%의 소거활성을 보였다. SOD 유사활성법은 PL(M), PL(E), PL(N-H) 순으로 활성이 높게 나타났으며 농도 증가에 따라 항산화 활성도 높게 나타났다. PL과 PS에 Cs을 첨가하여 항산화 효과를 검토하였는데 Cs와 PL의 혼합비율이 1:1(v:v)에서 1000 ppm 혼합용액을 만들었을 때 DPPH소거활성은 Cs+PL(M)이 61%로 가장 높은 소거활성을 나타냈으며 시료를 혼합하였을 경우 농도가 높은 것을 혼합할수록 DPPH 소거활성이 증가하는 경향을 나타남을 알 수 있었다. SOD 유사활성은 농도가 높은 시료를 혼합한 것일수록 SOD 유사활성이 증가하여 800 ppm 농도의 시료를 혼합한 용액은 Cs+PS(E), Cs)+PS(N-H), Cs+PS(M)순으로 각각 25%, 66%, 86%의 유사활성을 보여 단독시료보다 높은 항산화 효과를 나타냈다. 이상의 결과에서 잣잎과 잣껍질 추출물중에는 in vitro 항산화 실험에서 항산화 활성을 나타내는 생리활성 성분이 존재하는 것으로 볼 수 있으므로 천연 항산화제로서의 가능성을 시사하였다. Paper disc법에서 항균효과는 키토산과 잣잎, 잣껍질 추출물의 혼합액이 단독으로 사용한 것 보다 높은 항균 효과를 나타냈으며, 특히 Bacillus cereus 에서 항균성이 우수했다. 주입평판법에서 추출물의 항균효과는 0.45 mL 투입량에서 그람양성 및 그람음성 4가지 균(Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus and Escherichia coli) 모두 항균효과를 나타내었다. 모든 균주에서 PL(N-H)의 항균활성이 PL(E)와 PL(M)보다 높았다. 이는 지방을 추출할 수 있는 성질을 가지고 있는 n-hexane이 침엽수의 essential oil 성분을 추출함으로써 항균효과에 영향을 미친 것으로 생각된다. 이상의 실험결과를 토대로 천연물인 Cs과 PL, PS 추출물을 이용하여 항균활성을 연구한다면 의약품, 기능성화장품, 식품보존제 등 향후 다양한 산업에 활용이 기대된다.
The Pinus koraiensis is known as one of the most important natural resources frequently used as a traditional medicine. It''s effects have been reported in anti-aging, antibacterial and recovering from fatigue. In particular, polyphenols in the plant prevent and alleviate the diseases due to eliminating oxygen free radicals which cause aging and cancer. In this experiment, Pinus koraiensis (especially, pine koraiensis leaf(PL) and pine nut shell(PS)) was extracted using solvents and the total amount of polyphenols were ordered of methanol > ethanol > n-hexane. The antioxidant activities, antimicrobial and antifungal activities were investigated in chitosan (Cs), the extracts of PL and PS, and various mixing combinations of three materials. In the antioxidant activities, the results of DPPH-radical scavenging activities and SOD-like activities indicated that methanol extract had the highest activities. The addition of Cs in the extracts of PL and PS improved the antioxidant activities. Antibacterial activity was confirmed in gram(+) and 4 types of gram(-) such as Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus and Escherichia coli in addition of 0.45ml PL and PC. In the paper disc method, the addition of Cs in the extracts of PL and PS also improved the anti-bacterial activity. Especially, the highest antibacterial activities showed in the Bacillus cereus.
요 약 ⅰList of Scheme ⅲList of Table ⅲList of Figures ⅲⅠ. 서 론 1Ⅱ. 재료 및 실험 방법 41. 키토산과 잣잎,잣껍질 추출물의 항산화 효과 41.1 시약 및 재료 41.2 Pinus koraiensis Leaf, Pine nut Shell의 추출 41.3 탈아세틸화도(DAc)측정 51.4 점성도평균분자량 측정 51.5 기기 분석 71.5.1 Intrared spectrum 측정 71.5.2 UV spectrum 측정 71.5.3 UPLC 분석 71.6 총 폴리페놀 함량 81.7 총 플라보노이드 함량 81.8 항산화 효과 81.8.1 DPPH에 의한 free radical 소거활성 측정 81.8.2 SOD 유사 활성의 측정 92. 키토산과 잣잎, 잣껍질 추출물의 항균효과 92.1 시약 및 재료 92.2 Pinus koraiensis Leaf, Pine nut Shell의 추출 102.3 탈아세틸화도(DAc)측정 102.4 점성도평균분자량 측정 102.5 항균효과 112.5.1 시험균주 및 사용배지 112.5.2 항균실험 112.5.3 paper disc method 12Ⅲ. 결과 및 고찰 131. 키토산과 잣잎, 잣껍질 추출물의 항산화 효과 131.1 Cs의 점성도평균분자량과 탈아세틸화도 측정 131.2 PL과 PS 추출물 수율 131.3 총 폴리페놀 화합물의 함량 141.4 총 플라보노이드 함량 151.5 기기분석 161.5.1 Intrared spectrum 측정 161.5.2 UV spectrum 측정 161.5.3 UPLC 분석 161.6 항산화 효과 171.6.1 단독 시료의 DPPH에 의한 free radical 소거활성 측정 171.6.2 혼합 시료의 DPPH에 의한 free radical 소거활성 측정 181.6.3 단독 시료의 SOD 유사 활성의 측정 191.6.4 혼합 시료의 SOD 유사 활성의 측정 202. 키토산과 잣잎, 잣껍질 추출물의 항균 효과 322.1 Cs의 점성도평균분자량과 탈아세틸화도 측정 322.2 Disc 확산법에 대한 항균효과 322.3 용매에 따른 PL과 PS의 항균효과 332.4 균주에 따른 PL과 PS의 항균효과 352.4.1 Staphylococcus aureus에 대한 항균효과 352.4.2 Escherichia coli에 대한 항균효과 352.4.3 Bacillus subtilis에 대한 항균효과 362.4.4 Bacillus cereus에 대한 항균효과 362.5 Cs에 PL, PS의 혼합시료에 대한 항균효과 372.5.1 Cs에 PL 추출물 첨가에 따른 항균효과 372.5.2 Cs에 PS 추출물 첨가에 따른 항균효과 37Ⅳ. 결 론 52참 고 문 헌 54Abstract 61감사의 글 62