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논문 기본 정보
- 자료유형
- 학술저널
- 저자정보
- 발행연도
- 2021.9
- 수록면
- 195 - 206 (12page)
- DOI
- 10.17519/apiculture.2021.09.36.3.195
이용수
초록· 키워드
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결론적으로 꿀에 제작된 재조합 DNA를 넣어주고 인위적으로 혼입한 재조합 DNA의 특정 프라이머를 이용하여 유전자분리의 각 단계별 회수율을 검토하는 방법으로 꿀에서 가장 적절하게 잔류하고 있는 유전자 분리법을 정립하였다.
1. 벌꿀에서 잔류 DNA의 순수분리법
(1) 꿀 2 mL을 50 mL tube에 담고 GI buffer 10 mL을 넣고 5분간 Vortexer를 사용하여 섞어준다.
(2) GI buffer와 꿀을 잘 섞어준 용액 모두를 affinity column에 통과시킨다. 이때 column extension accessory와 column manifolder를 vacuum에 연결하여 사용하면 좀 더 손쉽게 column을 통과시킬 수 있다.
(3) 700 μL washing buffer를 column에 넣고 13000 rpm에서 30 sec 원심분리한다.
(4) Collection tube에 담긴 washing buffer를 제거한 후 column을 collection tube와 다시 결합시킨 후 1분간 13000 rpm으로 원심분리하여 알코올을 날려준다.
(5) Column을 collection tube에서 분리한 후 멸균된 1.5mL microcentrifuge tube에 놓는다.
(6) 50 μL의 3차 멸균수를 column의 정중앙에 tip이 닿지 않게 하여 떨궈준 후 1분간 정치한다.
(7) 13000 rpm에서 1분간 원심분리하여 넣어준 50 μL의 DNA 용액을 회수한다. 이를 확인 후 새 멸균 microcentrifuge tube에 담고 -20℃에 보관하여 PCR에 사용한다.
2. 잔류 DNA 분리에 사용되는 시약 및 그 조성
(1) DNA binding buffer; 5 M guanidine hydrochloride (GnHCl), 30% isopropyl alcohol
(2) Washing buffer; 15 mM Tris-HCl pH 7.6, 85% ethanol
(3) Elution buffer; 3차 멸균 증류수
1. 벌꿀에서 잔류 DNA의 순수분리법
(1) 꿀 2 mL을 50 mL tube에 담고 GI buffer 10 mL을 넣고 5분간 Vortexer를 사용하여 섞어준다.
(2) GI buffer와 꿀을 잘 섞어준 용액 모두를 affinity column에 통과시킨다. 이때 column extension accessory와 column manifolder를 vacuum에 연결하여 사용하면 좀 더 손쉽게 column을 통과시킬 수 있다.
(3) 700 μL washing buffer를 column에 넣고 13000 rpm에서 30 sec 원심분리한다.
(4) Collection tube에 담긴 washing buffer를 제거한 후 column을 collection tube와 다시 결합시킨 후 1분간 13000 rpm으로 원심분리하여 알코올을 날려준다.
(5) Column을 collection tube에서 분리한 후 멸균된 1.5mL microcentrifuge tube에 놓는다.
(6) 50 μL의 3차 멸균수를 column의 정중앙에 tip이 닿지 않게 하여 떨궈준 후 1분간 정치한다.
(7) 13000 rpm에서 1분간 원심분리하여 넣어준 50 μL의 DNA 용액을 회수한다. 이를 확인 후 새 멸균 microcentrifuge tube에 담고 -20℃에 보관하여 PCR에 사용한다.
2. 잔류 DNA 분리에 사용되는 시약 및 그 조성
(1) DNA binding buffer; 5 M guanidine hydrochloride (GnHCl), 30% isopropyl alcohol
(2) Washing buffer; 15 mM Tris-HCl pH 7.6, 85% ethanol
(3) Elution buffer; 3차 멸균 증류수
목차
Abstract
서론
재료 및 방법
결과 및 고찰
적요
인용문헌
참고문헌 (15)
참고문헌 신청
AOAC / 1995 / Official Method of Analysis of AOAC Intl / Association of Official Analytical Chemists
CODEX / 2001 / CODEX STANDARD FOR SUGARS / Official controls and enforcement
Elflein, L. / 2008 / Improved detectopm of honey adulteration by measuring differences between 13C/12C stable carbon isotope ratios of protein and sugar compounds with a combination of elemental anTable alyzer-isotope ratio mass spectrometry and liquid chromatomraphy-isoptope ratio mass spectrometry(δ13CEA/LC-IRMS) / Apidologie 39:574~587
Gadgil, H. / 2001 / Affinity purification od DNA-binding proteins / Journal of Biochemical and Biophysical Methods 49(1-3):607~624
Jain, S. A. / 2013 / Extraction of DNA from honey and its amplification by PCR for botanical identification / Food Sci. Technol 33(4):753~756
CODEX / 2001 / CODEX STANDARD FOR SUGARS / Official controls and enforcement
Elflein, L. / 2008 / Improved detectopm of honey adulteration by measuring differences between 13C/12C stable carbon isotope ratios of protein and sugar compounds with a combination of elemental anTable alyzer-isotope ratio mass spectrometry and liquid chromatomraphy-isoptope ratio mass spectrometry(δ13CEA/LC-IRMS) / Apidologie 39:574~587
Gadgil, H. / 2001 / Affinity purification od DNA-binding proteins / Journal of Biochemical and Biophysical Methods 49(1-3):607~624
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