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유사한 염기 서열을 가진 중복된 유전자(duplicated genes)는 진핵 생물 유전체에서 흔하게 발견되며, 이중에서 어떤 것들은 재조합을 허용할 만큼 충분한 상동성을 보여주기도 한다. ASN1과 ASN2는 open reading frame 전체에 걸쳐서 높은 상동성을 보이는 중복된 유전자의 한 예이다. 본 연구에서는 single-strand annealing 경로를 통하여 기능성 chimeric ASN 유전자를 제조하는 유전학적 방법을 고안하였다. HO endonuclease를 이용하여 ASN1과 ASN2 사이에 DNA double-strand break을 만들면 chimeric 유전자를 가진 돌연변이가 높은 빈도로 생성되었다. 돌연변이들은 모두 asparagine이 없는 배지에서 야생형과 비슷한 성장을 보였으며, 이는 chimeric ASN 유전자가 정상적인 기능을 한다는 것을 의미한다. Chimeric 유전자의 염기서열 분석 결과, 이들은 서로 다른 단일 접합부를 가지고 있었다. 이러한 결과는 상동성이 있는 유전자를 무작위로 융합하여 다양하고 많은 chimeric 유전자를 동시에 제조할 수 있는 방법을 제시하고 있다.
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Acevedo-Rocha CG, Ferla M, and Reetz MT. 2018. Directed evolution of proteins based on mutational scanning. Methods Mol. Biol. 1685, 87?128.
Anand RP, Tsaponina O, Greenwell PW, Lee CS, Du W, Petes TD, and Haber JE. 2014. Chromosome rearrangements via template switching between diverged repeated sequences. Genes Dev. 28, 2394?2406.
Baudin A, Ozier-Kalogeropoulos O, Denouel A, Lacroute F, and Cullin C. 1993. A simple and efficient method for direct gene deletion in Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 21, 3329?3330.
Bhargava R, Onyango DO, and Stark JM. 2016. Regulation of single-strand annealing and its role in genome maintenance. Trends Genet. 32, 566?575.
Choi DH, Lee R, Kwon SH, and Bae SH. 2013. Hrq1 functions independently of Sgs1 to preserve genome integrity in Saccharomyces cerevisiae. J. Microbiol. 51, 105?112.
Anand RP, Tsaponina O, Greenwell PW, Lee CS, Du W, Petes TD, and Haber JE. 2014. Chromosome rearrangements via template switching between diverged repeated sequences. Genes Dev. 28, 2394?2406.
Baudin A, Ozier-Kalogeropoulos O, Denouel A, Lacroute F, and Cullin C. 1993. A simple and efficient method for direct gene deletion in Saccharomyces cerevisiae. Nucleic Acids Res. 21, 3329?3330.
Bhargava R, Onyango DO, and Stark JM. 2016. Regulation of single-strand annealing and its role in genome maintenance. Trends Genet. 32, 566?575.
Choi DH, Lee R, Kwon SH, and Bae SH. 2013. Hrq1 functions independently of Sgs1 to preserve genome integrity in Saccharomyces cerevisiae. J. Microbiol. 51, 105?112.
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