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학술저널
저자정보
Kim, Bae-Chul (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University) Han, Rong-Xun (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University) Kim, Myung-Yoon (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University) Shin, Young-Min (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University) Park, Chang-Sik (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University) Jin, Dong-Il (Division of Animal Science and Resources, Research Center for Transgenic and Cloned Pigs, Chungnam National University)
저널정보
한국동물번식학회 한국동물번식학회지 한국동물번식학회지 제33권 제2호
발행연도
2009.1
수록면
107 - 111 (5page)

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The transfection efficiency of a transgene into pig and goat fetal fibroblast cells (PFF and GFF, respectively) was tested using co-transfection of a human tissue-type plasminogen activator (tPA) transgene and neomycin-resistant ($Neo^r$) gene, followed by G418 selection. To initially test G418 resistance, GFF and PFF were incubated in culture medium containing different concentration of G418 for 2 weeks, and cell survival was monitored over time. Based on the obtained results, the concentrations chosen for G418 selection were 800 ug/ml and 200 ug/ml for GFF and PFF, respectively. For co-transfection experiments, the pBC1/tPA and $Neo^r$ vectors were co-transfected into GFF and PFF ($1{\times}10^6$ cells in each case) using the FuGENE6 transfection reagent, and resistant colonies were obtained following 14 days of G418 selection. We obtained 96 and 93 drug-resistant colonies of GFF and PFF, respectively, only 54 and 39 of which, respectively, continued proliferating after drug selection. PCR-based screening revealed that 23 out of 54 analyzed GFF colonies and 5 out of 39 analyzed PFF colonies contained insertion of the tPA gene. Thus, the experimentally determined transfection efficiencies for tPA gene co-transfection with the $Neo^r$ gene were 42.6% for GFF and 12.8% for PFF. These findings suggest that co-transfection of a transgene with the $Neo^r$ gene can aid in the successful integration of the transgene into fetal fibroblast cells.
#Co-transfection #tPA gene #$Neo^r$ gene #Goat fetal fibroblasts #Pig fetal fibroblasts

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