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저자정보
김문규 (차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실) 문성환 (차바이오앤디오스텍) 박순정 (차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실) 이경일 (차바이오앤디오스텍) 신정민 (차바이오앤디오스텍) 장재우 (차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실) 정형민 (차의과학대학 의생명과학대학원 줄기세포 연구실)
저널정보
한국동물번식학회 한국동물번식학회지 한국동물번식학회지 제34권 제3호
발행연도
2010.1
수록면
135 - 141 (7page)

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Embryoid bodies (EBs) generated from human embryonic stem cells (hESCs) include spontaneously induced endodermal lineage cells (ELCs). Activin-A plays important roles in the endoderm differentiation of hESCs. Despite studies on the generation of ELCs from hESCs with treatment of Actvin-A, it was unclear for localization and pattern of ELCs by Activin-A during differentiation of hESCs. Accordingly in this study, we knew that Actvin-A increased the cystic EBs formation, including the highly enriched AFP (endoderm lineage specific marker)-expressing cells in the surface of cystic EBs. To induce the EBs formation from undifferentiated hESCs, cells were transferred onto petri-dish and cultured in suspension condition without bFGF removed hESC media (EB media) for 3 days. Next to investigate the effect of Activin-A, EBs were subsequently cultured in EB media supplement with 100 ng/ml Activin-A for 3 days. After 5~7 days of Activin-A treatment, cystic EBs began to appear which increased in numbers reaching ~60% of initially formed EBs over 5 days. Endoderm lineage marker, AFP were highly expressed and specifically localized at the surface region of cystic EBs comparison with normal EBs. We next attached the cystic EBs onto gelatin-coated plates and cultured for 5 days. In the results of real-time PCR and immunocytochemistry analysis, AFP-expressing cells migrated and localized at the outgrowth region of attached cystic EBs. To obtain the AFP-expressing cells of the outgrowth region, we manually isolated by using micro-dissection and cultured them. These cells strongly express AFP over 70% of isolated cells post re-plating. Here, we first showed an expression pattern of specifically localized ELCs by Activin-A during differentiation of hESCs. From this observation, we could highly purified ELCs from undifferentiated hESCs. Taken together, our system will provide a novel and efficient option to generate ELCs from hESCs.
#Human embryonic stem cells #EB formation #Endoderm differentiation #Activin-A #Micro-dissection

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