96-well microplate를 이용한 Trichophyton Rubrum의 항진균제 감수성검사

이무웅; 김종철; 최종수; 김기홍

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자료유형: 학술저널

저자정보: 이무웅 (영남대학교 의과대학 피부과학교실) 김종철 (영남대학교 의과대학 피부과학교실) 최종수 (영남대학교 의과대학 피부과학교실) 김기홍 (영남대학교 의과대학 피부과학교실)

저널정보: 영남대학교 의과대학 영남의대학술지 영남의대학술지 제9권 제2호

발행연도: 1992.1

수록면: 396 - 406 (11page)

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저자들은 Granade와 Artis의 방법에 따라 96-well microplate와 24-well macroplate를 이 용하여 T. rubrum 9주를 대상으로 경구용 항진균제인 ketoconazole과 itraconazole에 대한 MIC를 측정하여 실제 임상사용 가능성을 알아보고 배양온도, 배양용기의 크기, 배지의 종류를 달리하여 MIC에 영향을 줄 수 있는 요소를 점검하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 96-well microplate를 사용하여 $25^{\circ}C$에서 배양시 균농도에 따른 판독시기의 차이는 높은 균농도(흡광도 2.0, 1.0)에서는 4일만에, 낮은 균농도(흡광도 0.5, 0.25)에서는 6-8일만에 판독할 수 있었고, MIC는 높은 균농도에서 높았으나 시간이 경과시 점차 차이가 줄어들었다. 2. $37^{\circ}C$와 $25^{\circ}C$에서 각각 배양시 배양온도에 따른 MIC의 차이는 96-well microplate를 사용하여 $37^{\circ}C$에서 배양시 ketoconazole에 대한 MIC는 0.006이하-$0.04{\mu}g/ml$, itraconazole에 대한 MIC는 0.006이하-$0.04{\mu}g/ml$였으며 $25^{\circ}C$에서의 ketoconazole에 대한 MIC는 0.08-$5.68{\mu}g/ml$, itraconazole에 대한 MIC는 0.006-$0.71{\mu}g/ml$로 $37^{\circ}C$에서의 MIC는 $25^{\circ}C$에서의 MIC에 비해 현저히 낮았다. 3. 24-well microplate와 96-well microplate에서 각각 배양시 배양용기의 크기에 따른 판독시기는 96-well microplate 액체배지에서는 4-6일로 24-well macroplate 액체배지에서의 8-12일에 비해 판독시기가 빨랐으나, MIC의 차이는 없었다. 4. 액체배지와 고체배지에서 배양시 배지종류에 따른 MIC의 차이는 액체배지를 함유한 24-well macroplate를 이용한 경우 ketoconazole에 대한 MIC는 0.006이하-$5.68{\mu}g/ml$, itraconazole에 대한 MIC는 0.006 이하-$0.36{\mu}g/ml$였고 고체배지에서는 ketoconazole에 대한 MIC는 0.006이하-$5.68{\mu}g/ml$, itraconazole에 대한 MIC는 0.006 이하-$5.68{\mu}g/ml$로 고체배지에서의 MIC가 다소 높게 측정되었다. 5. 이상의 결과를 종합하여 볼때 96-well microplate를 사용하여, 흡광도 1.0의 균농도로 접종하여, $25^{\circ}C$에서 배양 후 5-6일째 육안으로 판독하는 것이 항진균제 감수성 검사를 빠르고 간편하게 실시 할 수 있는 방법이다.

Various susceptibility tests have been used to determine minimal inhibition concentration(MIC) of dermatophytes. They have limitations to apply practically because they need long time to determine MIC. Authors examined MIC of T. rubrum to ketoconazole and itraconazole using 96-well microplate and 24-well macroplate by method of Granade and Artis and tried to check the possibility of this method on clinical application. Nine strains of T. rubrum from patients with dermatophytosis were used. Evaluations of the factors affecting MIC were also tried. The results were as follows. 1. Effect of inoculation density on determination time and MIC : Determination of MIC were possible in 4th days after inoculation at higher inoculation density Caborbance 2.0, 1.0) compared to 6th days at lower inoculation density(absorbance 0.5, 0.25). 2. Effect of incubation temperature on MIC : When incubating at $37^{\circ}C$, MIC were below 0.006-$0.04{\mu}g/ml$ to ketokckonazole and below 0.006-$0.04{\mu}g/ml$ to itraconazole while at $25^{\circ}C$ 0.08-$5.68{\mu}g/ml$ to ketoconazole and 0.006-$0.71{\mu}g/ml$ to itraconazole. Significant reduction of MIC was observed at $37^{\circ}C$ compared to $25^{\circ}C$. 3. Effect of container size on determination time and MIC : When incubating in 96-well microplate and 24-well macroplate, determination of MIC was possible in 4th to 6th days after inoculation in broth-containig 96-well microplate compared to 8th to 12th days in broth-containing 24-well macroplate. But no difference in MIC was observed between different container size. 4. Effect of media on MIC : When using broth as media, MIC were below 0.006-$5.68{\mu}g/ml$ to ketoconazole, below 0.006-$0.36{\mu}g/ml$ to itraconazole in broth-containg 24-well macroplate. When using agar as media, MIC were below 0.006-$5.68{\mu}g/ml$ to ketoconzole, below 0.006-$5.68{\mu}g/ml$ to intraconzole in agar-containing 24-well macroplate. There was slight increase of MIC with agar media compared to broth media. 5. These findings confirm that determination of MIC of dermatophtes by method of Granade and Artis is fast and simple technique for antifungal susceptibility test.

#MIC #minimal inhibition concentration) #Microculture #Trichophyton rubrum #Ketoconazole #Itraconazole

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최종수

소속기관 영남대학교

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주요연구분야 의약학 > 의학 일반 의약학 > 기초의학 > 예방의학·직업환경의학

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