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Heterosigma akashiwo는 전세계적으로 분포된 침편모조류이며, 대발생을 형성하여 많은 나라의 양식산업에 커다란 손실을 유발시킨다. 따라서 빠르고 민감한 검출방법을 개발하는 것은 유해조류 대발생에 대한 적절한 경보를 위해서 필요하다. 이 연구에서는 H. akashiwo를 정성 및 정량적으로 검출하기 위하여 뉴클레아제 보호 분석이 통합된 샌드위치 혼성(NPA-SH)을 개발하였다. NPA-SH 프로브는 여섯 종의 미세조류 핵산 서열을 이용하여 디자인 후, 특이성을 확인하여 capture 프로브와 signal 프로브를 선정하였다. 배양시료와 현장시료를 이용하여 NPA-SH의 적용성을 평가한 결과, NPA-SH의 좋은 적용성과 효과를 확인하였다. H.akashiwo의 정량분석을 위한 선형회귀식을 확인하였으며, 최소 검출한계는 1×10⁴ cells/ml이었다. NPA-SH를 사용하여 얻은 H. akashiwo의 정량결과와 현미경을 사용하여 얻은 결과 사이에는 통계학적으로 유의한 차이는 없었다. NPA-SH 분석은 환경시료에 잘 적용되었다. 이러한 결과는 NPA-SH가 H. akashiwo의 모니터링에 사용되어 왔던 전통적인 현미경적 방법에 대한 좋은 대안이 될 수 있음을 보여준다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Result and Discussion
References
초록
참고문헌 (18)
참고문헌 신청
Blanco, E. P., Hagstrom, J., Salomon, P. S. and Graneli, E. 2013. Detection of Heterosigma akashiwo (Hada) using specific RNA probes: variability of RNA content with environmental conditions. Harmful Algae 24, 80-88.
Bowers, H. A., Tomas, C., Tengs, T., Kempton, J. W., Lewitus, A. J. and Oldach, D. W. 2006. Raphidophyte [Chadefaud ex Silva] systematics and rapid identification: sequence analyses and real-time PCR assays. J. Phycol. 42, 1333-1348.
Cai, Q., Li, R., Zhen, Y., Mi, T. and Yu, Z. 2006. Detection of two Prorocentrum species using sandwich hybridization integrated with nuclease protection assay. Harmful Algae 5, 300-309.
Chen, G. F., Wang, G. C., Zhang, C. Y., Zhang, B. Y., Wang, X. K. and Zhou, B. C. 2008. Development of rRNA and rDNA-targeted probes for fluorescence in situ hybridization to detect Heterosigma akashiwo (Raphidophyceae). J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 355, 66-75.
Doll, C., Main, C. R., Bianco, C., Coyne, K. J. and Greenfield, D. I. 2014. Comparison of sandwich hybridization assay and quantitative PCR for the quantification of live and preserved cultures of Heterosigma akashiwo (Raphidophyceae). Limnol. Oceanogr. Meth. 12, 230-243.
Bowers, H. A., Tomas, C., Tengs, T., Kempton, J. W., Lewitus, A. J. and Oldach, D. W. 2006. Raphidophyte [Chadefaud ex Silva] systematics and rapid identification: sequence analyses and real-time PCR assays. J. Phycol. 42, 1333-1348.
Cai, Q., Li, R., Zhen, Y., Mi, T. and Yu, Z. 2006. Detection of two Prorocentrum species using sandwich hybridization integrated with nuclease protection assay. Harmful Algae 5, 300-309.
Chen, G. F., Wang, G. C., Zhang, C. Y., Zhang, B. Y., Wang, X. K. and Zhou, B. C. 2008. Development of rRNA and rDNA-targeted probes for fluorescence in situ hybridization to detect Heterosigma akashiwo (Raphidophyceae). J. Exp. Mar. Biol. Ecol. 355, 66-75.
Doll, C., Main, C. R., Bianco, C., Coyne, K. J. and Greenfield, D. I. 2014. Comparison of sandwich hybridization assay and quantitative PCR for the quantification of live and preserved cultures of Heterosigma akashiwo (Raphidophyceae). Limnol. Oceanogr. Meth. 12, 230-243.
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