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논문 기본 정보

자료유형
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저자정보
저널정보
한국환경보건학회 한국환경보건학회지 한국환경보건학회지 제36권 제4호
발행연도
2010.1
수록면
338 - 342 (5page)

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The modified simultaneous differential staining technique, which enables double staining of cartilage and bones,needs to be improved to prevent soft tissues from being damaged during the staining process. Key factors influencing the extent to which soft tissues are damaged include the fixative used, macerating time, potassium hydroxide concentration, incubation temperature and the removal of skin from specimens. Here we describe a protocol that enables the hardening of tissues during bleaching and maceration. We also describe a method for objectively measuring rates of cartilage and bone growth. The use of formalin as a fixative rendered soft tissues more rigid due to the resulting chemical bonds formed between proteins. Blotted specimens were immersed in 1%potassium hydroxide (KOH) and incubated at 37oC for 1 day (smaller specimens) or 2-3 days (larger specimens). The 1% KOH solution was also used as the diluent solution for the subsequent immersion in a graded series of 30%,50%, 70%, 90%, 100% glycerol solutions, a procedure that made soft tissues even more transparent and hardened. It was not necessary to remove the skin of specimens shorter than 2 cm, since the macerating solution could easily penetrate their thin skin layer and continuously remove those pigments hindering visibility. Since excessive osmosis is another factor that can damage soft tissues in the macerating process by causing the rupture of those cells not able to withstand the osmotic pressure, here it was minimized by balancing the salt concentration between the interior and exterior of cells with the addition of 0.9% sodium chloride (NaCl) in the macerating solution. Finally, to determine the proportions of cartilage and bone growth, photographs of the stained specimens were taken with a dissecting microscope and sections corresponding to the cartilage and bones were cut out from the printed pictures and weighed. Our results show that this method is suitable for the objective evaluation of bone and cartilage growth.
#staining #alcian blue #alizarin red #cartilage #bone #skeleton

목차

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참고문헌 (19)

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/ / Wikipedia:Cytolysis,the free encyclopedia google schola Al-Saraj, A / 2010 / Use of saturated sodium chloride solution as a tissue fixative / Iraqi Journal of Veterinary Sciences 24 (1) : 53 ~ 58 google schola Baker,J.R / 1958 / Principles of biological microtechnique / Methuen : 1 ~ 368 google schola Borg, F. G / 2003 / What is osmosis? Explanation and understanding of a physical phenomenon / General Physics, Jyvaskyla University, Chydenius Institute, Karleby : 1 ~ 39 google schola Crary, D. D / 1962 / Modified benzyl alcohol clearing of alizarin stained specimens without loss of flexibility / Stain Technology 37 : 124 ~ 125 google schola

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