인간자궁내막의 탈락막화가 유리화동결된 생쥐 포배아와 신선 포배아의 부화율에 미치는 영향

손성대; 주종길; 이규섭; 고경래; 정지혜; 최종렬

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자료유형: 학술저널

저자정보: 손성대 주종길 이규섭 고경래 정지혜 최종렬

저널정보: 대한산부인과학회 Obstetrics & Gynecology Science Obstetrics & Gynecology Science 제52권 제3호

발행연도: 2009.1

수록면: 336 - 345 (10page)

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목적: 본 연구는 자궁내막조직에서 분리한 상피세포와 기질세포를 공배양한 다음 TGF-β1과 progesterone을 첨가하여 탈락막화를 유도한 후 동결하거나 동결하지 않은 생쥐 포배아와 공배양을 통한 부화율을 조사하여 보조부화술의 필요성을 알아보기 위하여 실행되었다. 연구 방법: 인간자궁내막조직으로부터 분리한 상피세포와 기질세포를 공배양한 후 progesterone과 TGF-β1을 첨가하여 탈락막화를 유도한 다음 신선 생쥐 포배아와 유리화동결된 생쥐 포배아를 각각 공배양하여 부화율을 비교하였다. 결과: 자궁내막조직에서 상피세포와 기질세포를 분리하여 상피세포 표지인자인 cytokeratin과 기질세포 표지인자인 vimentin을 이용하여 면역조직화학염색을 한 결과 각각 95% 이상에서 양성반응을 나타내어 자궁내막조직으로부터 상피세포와 기질세포가 성공적으로 분리되었음을 확인하였다. 기질세포와 상피세포의 공배양에 TGF-β1과 progesterone을 첨가하지 않은 군에서는 탈락막화 표지인자인 Integrin-β3와 prolactin mRNA가 발현되지 않았으나 첨가한 군에서는 Integrin-β3와 prolactin mRNA가 발현되어 TGF-β1과 progesterone에 의해 탈락막화가 이루어짐을 알 수 있었다. 인간 자궁내막세포를 탈락막군과 비탈락막군으로 나누어 각 군별로 유리화동결한 생쥐 포배아와 유리화 동결하지 않은 포배아를 각각 공배양하여 부화율을 조사한 결과 탈락막화에 관계 없이 유리화동결군에서 유의하게 낮은 부화율을 나타내었다 (P<0.05). 결론: 이상의 결과에서 자궁내막세포의 탈락막화는 유리화동결된 생쥐포배아의 투명대경화 현상을 극복하지 못해 부화율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었으며, 동결보존된 포배아의 부화율 향상을 위하여 보조부화술이 필요함을 알 수 있었다.

Objective: To compare the hatching rates of the vitrified and the fresh mouse blastocysts co-cultured with decidualized or non decdualized human endometrial cells and to confirm the necessity of assisted hatching in the vitrified mouse blastocyst. Methods: Stromal and epitherial cells isolated from human endometrial tissue were co-cultured and decidualized with TGF-β1 and progesterone. The vitrified and the fresh mouse blastocysts were co-cultured with human decidualized or non-decidualized endometrial cells, respectively and the hatching rates were investigated. Results: Epithelial and stromal cells isolated from endometrial tissue were cultured seperately for 24 hours and stained by immunohistochemical staining for cytokeratin (epithelial cells) or vimentin (stromal cells). The immunohistochemical study was positive for cytokeratin or vimentin and confirmed that epithelial and stromal cells were isolated from endometrial tissue successfully. The co-cultured human stromal and epitherial cells were decidualized by administration of TGF-β1 and progesterone. The hatching rates of the fresh and the vitrified mouse blastocysts co-cultured with decidualized human endometrial cells were 89% and 31%, respectively. The hatching rates of the fresh and the vitrified mouse blastocysts co-cultured with non-decidualized human endometrial cells were 82% and 27%, respectively. The hatching rates were significantly higher in fresh mouse blastocysts than in vitrified mouse blastocysts regardless of decidualization of human endometrial cells (P<0.05). Conclusion: The hatching rate was significantly higher in fresh mouse blastocysts than in vitrified mouse blastocysts. This results showed that the cryopreservation procedure caused the zona hardening of mouse blastocyst and the decidualization of endometrial cells did not affect to hatching rate of the vitrified mouse blastocysts. We confirmed that assisted hatching was necessary for improving the hatching rate of cryopreserved mouse blastocysts.

#탈락막화 #포배아 #공배양 #부화 #Decidualization #Blastocyst #Co-culture #Hatching

참고문헌 (25)

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Ando N / 1998 / Differential gene expression of TGF-beta isoforms and TGF-beta receptors during the first trimester of pregnancy at the human maternal-fetal interface / Am J

Austin CR / 1961 / The Mammalian Egg / Blackwell : 89 ~ 97

Betteridge KJ / 1976 / Possible role of the embryo in the control of oviduct transfort in mares. in: Ovum Transfort and Fertility regulation / Scriptor, Ltd. : 381 ~ 389

Bider D / 1997 / Assisted hatching by zona drilling of human embryos in women of advanced age / Hum Reprod 12 : 317 ~ 320

Carroll J / 1990 / Freeze-thawinduced changes of the zona pellucida explains decreased rates of fertilization in frozen thawed mouse oocytes / J Reprod Fertil 90 : 547 ~ 553

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