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The nutritional medium requirement for biosurfactantBacilus licheniformis K51 was optimized. Theimportant medium components, identified by the initial screeningmethod of Plackett-Burman, were H3PO4, CaCl2, H3BO3, andNa-EDTA. Box-Behnken response surface methodology wasapplied to further optimize biosurfactant production. Theoptimal concentrations for higher production of biosurfactantswere (g/l): glucose, 1.1; NaNO3, 4.4; MgSO4·7H2O, 0.8; KCl,0.4; CaCl2, 0.27; H3PO4, 1.0 ml/l; and trace elements (mg/l):H3BO3, 0.25; CuSO4, 0.6; MnSO4, 2.2; Na2MoO4, 0.5; ZnSO4,6.0; FeSO4, 8.0; CoCl2, 1.0; and Na-EDTA, 30.0. Using thisstatistical optimization method, the relative biosurfactant yield ascritical micelle dilution (CMD) was increased from 10× to 105×,which is ten times higher than the non-optimized rich medium.

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