Cloning and Site-Directed Mutagenesis of Musca domestica Acetylcholinesterasefor Enhancing Sensitivity to Organophosphorus and Carbamate Insecticides

KIM; CHUNG-SEI; SU-IL KIM

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자료유형: 학술저널

저자정보: KIM CHUNG-SEI SU-IL KIM

저널정보: 한국미생물생명공학회 Journal of Microbiology and Biotechnology Journal of Microbiology and Biotechnology 제16권 제11호

발행연도: 2006.1

수록면: 1,760 - 1,772 (13page)

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Mature acetylcholinesterase (AChE) gene (gm,1,836 bp) was cloned from the housefly and successfullyexpresed in the E. coli CodonPlus (DE3) RIL system (GM-E,72 kDa) with a yield of 1,630 mU/g fresh cels. Using the gm,10 kinds of mutants were constructed and expresed for enhancingsensitivity to insecticides. The sensitivity of these mutants to fivewas investigated by measuring the apparent bimolecularinhibition constant (ki=k2/Kd). Surprisingly, the sensitivity ofquadruple mutant IGFT was enhanced as much as 7-foldfor acephate, 164-fold for demeton-S-methyl, 484-fold fordichlorvos, 523-fold for edifenphos, 30-fold for ethoprophos,30-fold for benfuracarb, 404-fold for carbaryl, and 107-foldfor furathiocarb, compared with that of GM-E, although theThese mutational studies indicated that (i) contradictory toWalsh et al. [39], the residue 327 is the important key residuefor enhancing sensitivity as much as the residue 262, (ii) theresidue 82 and aditional residues of 234, 236, and 585 arealso important, and (iii) sensitivity was cooperatively acceleratedas the number of strategic mutations increased.

#Acetylcholinesterase #housefly #insecticideaparent bimolecular rate constant of inhibition #ki)Acetylcholinesterase #AChE #EC 3.1.1.7) is a serine-typecarboxylesterase that catalyzes the hydrolysis of theneurotransmitter acetylcholine in neuromuscul

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Bachmann, T. T / 1999 / A disposable, multielectrode biosensor for rapid simultaneous detection of the insecticides paraoxon and carbofuran at high resolution / Analyt. Chim.

Chung-Sei Kim / 2003 / Cloning, Mutagenesis, and Expression of the Acetylcholinesterase Gene from a Strain of Musca domestica; the Change from a Drug-resistant to a Sensitiv

Cuatrecasas, P / 1968 / Selective enzyme purification by affinity chromatography / Proc. Natl. Acad. Sci. USA 61 : 636 ~ 643

Cuatrecasas, P / 1970 / Protein purification by affinity chromatography. Derivatizations of agarose and polyacrylamide beads / J. Biol. Chem. 245 : 3059 ~ 3065

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