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Corynebacterium ammoniagenes ATCC 6872, whichdoes not accumulate pyrimidine nucleoside or nucleotide,was metabolically engineered to secrete a large amount ofthymidine. Characteristics of 5-fluorouracil resistance (FUr),hydroxyurea resistance (HUr), trimethoprim resistance (TMr),thymidylate phosphorylase deficiency (deoA-), inosine auxotrophy(ino-), 5-fluorocytosine resistance (FCr), thymidine kinasedeficiency, and thymidine resistance (thymr) were successivelyintroduced into mutant strains KR3 and DY5T9-5, andshake-flask cultures were able to accumulate 408.1 mg/land 428.2 mg/l of thymidine, respectively, as a majorproduct. The mutant strains did not accumulate thymine atall and accumulated less than 10 mg/l of other pyrimidinenucleosides, such as cytosine, cytidine, and deoxycytidine, asbyproducts.

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