Unicry1 표본에서 광학⁄전자 현미경 In Situ Hybridization -Rabbit hemorrhagic disease viral RNA 증명-

주경웅

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자료유형: 학술저널

저자정보: 주경웅

저널정보: 대한임상검사과학회 대한임상검사과학회지 대한임상검사과학회지 제30권 제3호

발행연도: 1998.1

수록면: 250 - 260 (11page)

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Rabbit hemorrhagic disease(RHD) which was first recognized in China in 1984 spread via Eastern Europe many countries of Western Europe and other part of the world. This study is purposed to detection of RHD viral RNA by in situ hybidization(ISH) as the immunohistochemical technique on base of the hemagglitinin inhibition titer and histopathologically changes after innoculation of rabbits with isolated of RHDV obtained form RHD infected cell. After experimental intramuscular infections with isolates of the virus, Infection were leaded acute RHD and showed convulsions, paresis and sometimes bloody or bloody-foamy nasal excretions. The body temperature of all cases show some fever shortly before death. In order to detect antibodies to RHDV, the hemagglutinin inhibition test, animal which survived an infection with RHDV developed antibodies to RHDV, which were highly dectable at 12 hours after post infection, these antibody titers reached highest on 48 hours after infection. Histopathologically, in the liver early after infection were detected of hemorrhages, degenerative perilobular alterations in hepatocytes strongly homogenous or pale vacuolized cytoplasm, nuclear pyknosis, karyorrhexis of karyolysis were observed. Antibodies to RHDV were found in sera that indicate the existence of an pathogenic virus which is related to RHDV. Simple stain and loght microscopic ISH make possible using semi-thick sections to the post-unicryl embedded block for electron microscopic ISH. There, it was established compared to viral focal location at same region. Hibridization for detection of viral RNA in unicryl embedded tissues using complementary 84 bases oligonucleotide probes labelled by biotin cyanoethyl-phosphoramidite compared with 4717-4800 sequences of RHDV cDNA. The best results were obtained to retention and accessibility of RHDV in 0.02% glutaraldehyde, depression of aldehyde group by ammonium hydroxide, unicryl resin block and block stain, biotinylated oligonucleotide probes cocktail, acetylation, hybridization during 2 hours at 37℃ and signal marked by antibiotin antibody-10 nm gold. ISH microparticles signal on light microscopic in situ hybridization on semi-thick sections of normal cells and RHDV infected liver using biotinylated probe. It appears as if indicate the presence of RHD viral nucleic acids by showed gold dense signal, appearing in the cytoplasm of degenerated hepatocytes of sudden death cases. Infected cells are easily recognized to condensed nucleus and central vacuoles. But, the light microscopic ISH were not showed to possitive reaction because of limits of resolving power of light microscope and immuno-gold size. At the electron microscopic ISH, RHD viral RNA was distributed widely in the cytoplasm of liver cell. Gold particles were separated of inner and outer nuclear membrane with destruction of the membrane, and diliatation of rough endoplasmic reticulum in the cell. Many viral RNA gold partocles are present in the Juxtanuclear cytoplasm and in the vicinity of rER of natural cases of sudden death and clusters of virus particles are seen in the cytoplasm.

#Rabbit hemorrhagic disease virus #Unicryl #In situ hydridization #Oligonucleotide #Probes #Acetylation #Biotin #Electronmicroscope

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