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자료유형
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저자정보
저널정보
한국식물생명공학회 Journal of Plant Biotechnology Journal of Plant Biotechnology 제37권 제2호
발행연도
2010.1
수록면
174 - 185 (12page)

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Full-length cDNAs are essential for the correct annotation of genomic sequences and for the functional analysis of genes and their products. To elucidate the functions of a large population of Chinese cabbage (Brassica rapa) genes and to search efficiently for agriculturally useful genes, we have been taking advantage of the full-length cDNA Over-eXpresser (FOX) gene hunting system. With oligo dT column it purify the each mRNA from the flower organs, leaf and stem tissue. And about 120,000 cDNAs from the library were transformed into λ-pFLCIII-F vector. Of which 115,000 cDNAs from the library were transformed into T-DNA binary vector, pBigs for transformation study. We used normalized full-length cDNA and introduced each cDNA into Arabidopsis by in planta transformation. Fulllength Chinese cabbage cDNAs were expressed independently under the CaMV 35S promoter in Arabidopsis. Selfed seeds were harvested from transgenic Arabidopsis. We had selected 2,500 transgenic plants by hygromycin antibiotic tolerant test, and obtained a number of transgenic mutants. Each transgenic Arabidopsis was investigated in morphological changes, fertility and leaf colour. As a result, 285 possible morphological mutants were identified. Introduced cDNA was isolated by PCR amplification of the genomic DNA from the transgenic mutants. Sequencing result and BLAST analysis showed that most of the introduced cDNA were complete cDNAs and functional genes. Also, we examined the effect of Bromelain on enhancing resistance to soft rot in transgenic Chinese cabbage ‘Osome’. The bromelain gene identified from FOX hunting system was transformed into Chinese cabbage using Agrobacterium methods. Transformants were screened by PCR, then RT-PCR and real time PCR were performed to analyze gene expression of cysteine protease in the T1 and T2 generations. The anti-bacterial activity of bromelain was tested in Chinese cabbages infected with soft rot bacteria. The results showed that the over-expressed bromelain gene from pineapple conferred enhanced resistance to soft rot in Chinese cabbage.
#Full length cDNA #overexpression #transgenic plants #morphological mutants #FOX hunting system

목차

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An S / 2003 / Generation and analysis of end sequence database for T?DNA tagging lines in rice / Plant Physiol 133 : 2040 ~ 2047 google schola Chaudhury AM / 1989 / Non-destructive transformation of Arabidopsis / Plant Mol. Bio. Rep. 7 : 258 ~ 265 google schola Chen S / 2003 / Distribution and characterization of over 1,000 T?DNA tags in rice genome / Plant J. 36 : 105 ~ 113 google schola Engwerda CR / 2001 / Bromelain modulates T cell and B cell immune responses in vitor and in vivo / Cell Immunol. 25 : 66 ~ 75 google schola Fujita M / 2007 / Identification of stress?tolerance?related transcription?factor genes via mini?scale full?length cDNA over?expressor (FOX) gene hunting system / Bioche. Bio google schola

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