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본 연구에서는 zebrafish에 사람의 cyt b<SUB>5</SUB> 유전자를 microinjection하여 발현시키고, 그 결과를 형광으로 확인하였다. HeLa cell에서 RT-PCR을 진행한 결과 414 bp의 cyt b<SUB>5</SUB> band가 증폭되었다. 염기서열 분석으로 재확인된 cyt b<SUB>5</SUB> insert를 pEGFP-N3의 형광 vector에 클로닝하였고, 이렇게 준비된 pEGFP-N3-cyt b<SUB>5</SUB> plasmid DNA를 1세 포기의 수정란에 microinjection하였다. cyt b<SUB>5</SUB>를 microinjection한 치어를 형광현미경으로 관찰한 결과 대조군 치어보다 훨씬 선명한 형광을 띠는 것이 확인되었다. 최종적으로 치어에서 RNA를 분리하여 RT-PCR하였고 전기영동과 DNA sequencing으로 fusion 단백질의 발현을 재확인하였다. Cyt b<SUB>5</SUB>의 발현으로 인해 zebrafish의 생존율이 다소 떨어지는 것으로 확인되었기에 독성 문제를 해결하기 위한 연구가 계속 필요할 것으로 사료된다. 이 연구는 향후 cyt b<SUB>5</SUB>가 결핍되었을 경우 발생할 수 있는 여러 질병들을 유전자 차원에서 치료하고, 유용 유전자 클로닝을 위한 기술 개발에 발판이 될 수 있을 것으로 기대된다.
목차
서론
재료 및 방법
결과
고찰
References
초록
참고문헌 (27)
참고문헌 신청
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