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진균류의 세포벽은 다양한 결합의 글루칸과 키틴질로 구성되었으며 이들의 생활사 전체에 해당하는 균사생장과 분화과정에서 키틴질 분해효소(chitinase)를 생성한다. 먹물버섯의 하나인 Coprinellus congregatus는 전 생활사 동안 최소 2종 이상의 chitinase를 생성한다. Chi1은 균사시기부터 버섯의 자가분해 시기까지 고르게 생성되며, chitinase 2는 버섯 자가분해 시기에 다량 생성된다. Chi1의 cDNA 유전자를 Pichia pastoris의 발현벡터의 하나인 pPICZB 벡터의 c-myc과 6x Histidine tag을 포함하는 Chi1 재조합 단백질 발현벡터를 구축하고 이를 발현시킨 후, Histidine tag에 의한 affinity chromatography 방법으로 Chi1 단백질을 정제하였다. 정제된 Chi1은 endochitinase의 기질인 4-nitrophenyl N,N’,N’’-triacetyl-β-D-chitotrioside에 대하여 활성을 보였다. 이를 기질로 사용했을 때 최적 pH는 8.0이었고, 최적 온도는 35℃로 확인되었다. Km 값과 Vmax 값은 각각 0.780mM과 0.10 (OD min-1unit-1)로 나타났다. 이러한 생화학적 특성은 버섯 자가분해 시기에 작용할 것으로 판단되는 Chi2가 exochitinase 활성을 보이며, pH 4.0에서 최대 활성을 보이는 것을 종합하면 상호 보완작용을 할 것이라고 판단된다. 정제된 Chi1은 Alternaria alternata, Fusarium graminearum 및 Trichoderma harzianum 등과 같은 식물 병원성 균류에 처리한 결과 60 μg/ml 농도에서 이들의 생장을 완전하게 억제하였다.
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재료 및 방법
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참고문헌
참고문헌 (11)
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1. [학술지(정기간행물)] - Brzezinska, M.S / 2012 / Production of antifungal chitinase by Aspergillus niger LOCK 62 and its potential role in the biological control / Curr. Microbiol 65 : 666 ~ 672
3. [학술지(정기간행물)] - Yuri Kang / 2013 / Biochemical Characterization of Chitinase 2 Expressed during the Autolytic Phase of the Inky Cap, Coprinellus congregatus / The Journal of Microbiology 51 (2) : 189 ~ 193
4. [학술지(정기간행물)] - 김윤정 / 2006 / 먹물버섯의 생성·자가소화 과정에서 laccase 및 chitinase의 발현 / 미생물학회지 42 (3) : 235 ~ 237
5. [학술지(정기간행물)] - Kovács, G. / 2013 / Expression of a rice chitinase gene in transgenic banana (‘Gros Michel’, AAA genome group) confers resistance to black leaf streak disease / Transgenic Res 22 : 117 ~ 130
6. [학술지(정기간행물)] - Hyangsoon Lim / 2009 / Enhanced Expression of Chitinase during the Autolysis of Mushroom in Coprinellus congregatus / The Journal of Microbiology 47 (2) : 225 ~ 228
3. [학술지(정기간행물)] - Yuri Kang / 2013 / Biochemical Characterization of Chitinase 2 Expressed during the Autolytic Phase of the Inky Cap, Coprinellus congregatus / The Journal of Microbiology 51 (2) : 189 ~ 193
4. [학술지(정기간행물)] - 김윤정 / 2006 / 먹물버섯의 생성·자가소화 과정에서 laccase 및 chitinase의 발현 / 미생물학회지 42 (3) : 235 ~ 237
5. [학술지(정기간행물)] - Kovács, G. / 2013 / Expression of a rice chitinase gene in transgenic banana (‘Gros Michel’, AAA genome group) confers resistance to black leaf streak disease / Transgenic Res 22 : 117 ~ 130
6. [학술지(정기간행물)] - Hyangsoon Lim / 2009 / Enhanced Expression of Chitinase during the Autolysis of Mushroom in Coprinellus congregatus / The Journal of Microbiology 47 (2) : 225 ~ 228
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