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세포 내에서 매우 적은 양으로 존재하는 RNA 전사체와 기능적으로 동일하거나 비슷한 RNA를 RNA 중합효소를 써서 in vitro에서 생화학적으로 의미 있는 양 만큼을 합성할 수 있다. T7 RNA 중합효소를 발현하는 재조합 유전자를 지닌 대장균주 BL21/pAR1219로부터 순수한 T7 RNA 중합효소를 손쉽게 얻는 방법을 본 논문에서 소개한다. 황산암모늄 분획화와 sephadex SP 컬럼 크로마토그래피법으로써 여타의 방법과 비교하여 더 간단하고 빠르게, 그리고 경제적으로 T7 RNA 중합효소를 분리할 수 있었다. 정제된 T7 RNA 중합효소를 이용하여 보통의 화학적 합성법으로 불가능한 긴 길이(1.54 kb)의 RNA 전사체를 합성 하였다. 한편, 정제된 T7 RNA 중합효소에 의해 생성된 망치머리 리보자임은 표적 RNA를 in vitro에서 절단함으로써, 생성된 RNA가 생화학적 기능성을 유지한다는 것을 입증하였다. 따라서 본 연구에서 소개되는 절차들은 다양한 길이의 RNA를 목적에 따라 간단하고 경제적으로 합성하는데 유용하게 이용될 수 있다.
목차
Abstract
Materials and Methods
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References
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참고문헌 (23)
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Amarzguioui M. and Prydz H. 1998. Hammerhead ribozyme design and application. Cell. Mol. Life Sci. 54, 1175–1202.
Arnaud, N., Cheynet, V., Orid, G., Mandrand, B., and Mallet, F. 1997. Constructing and expression of a modular gene encoding bacteriophage T7 RNA polymerase. Gene 199, 149-156.
Birikh K. R., Berlin Y. A., Soreq H. and Eckstein F. 1997. Probing accessible sites for ribozymes on human acetylcholinesterase RNA. RNA 3, 429–437.
Cate, J. H., Gooding, A. R., Podell, E., Zhou, K., Golden, B. L., Kundrot, C. E., Cech, T. R., and Doudna, J. A. 1996. Crystal structure of a group I ribozyme domain: Principles of RNA packing. Science 273, 1678-1685.
Chapman, K. A., and Burgess, R. R. 1987. Construction of bacteriophage T7 late promoters with point mutations and characterization by in vitro transcription properties. Nucleic Acids Res. 15, 5413-5432.
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